公开(公告)号：KR101016766B1

公开(公告)日：2011-02-25

申请号：KR1020090003431

申请日：2009-01-15

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 안희철 ,  안형준 ,  신동윤 ,  임종수 ,  안대로

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/63 ,  C12N15/64 ,  C12N15/09

CPC classification number: C12N15/70 ,  C07K2319/35

Abstract: 본 발명은 티오레독신(thioredoxin)을 융합 파트너로 포함하는 단백질 발현용 플라스미드, 이 플라스미드로 형질전환된 대장균 및 이 대장균을 이용한 목적 단백질의 효율적인 생산방법에 관한 것으로, 본 발명에 따르면 티오레독신이 융합된 단백질에서 티오레독신을 효율적으로 쉽게 제거할 수 있으므로 의약 및 생명공학 분야에서 필요한 목적 단백질을 순수하게 대량으로 효율적으로 생산할 수 있다.
티오레독신, 융합 단백질, pET-32-S(-) 플라스미드, 단백질 발현, 부위-특이적 결실 돌연변이

公开(公告)号：KR1020100084039A

公开(公告)日：2010-07-23

申请号：KR1020090003431

申请日：2009-01-15

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 안희철 ,  안형준 ,  신동윤 ,  임종수 ,  안대로

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/63 ,  C12N15/64 ,  C12N15/09

CPC classification number: C12N15/70 ,  C07K2319/35

Abstract: PURPOSE: A plasmid for expressing protein containing thioredoxin as a fusion partner is provided to easily remove thioredoxin and to massively produce a target protein. CONSTITUTION: A pET-32-S(-) plasmid contains a multi-cloning site for inserting thioredoxin gene, thrombin recognition site, S-tag coding region, and a gene encoding a target protein. A method for producing the target protein comprises: a step of inserting the gene encoding target protein into a multi-cloning site of a plasmid; a step of transforming the plasmid to E.coli and culturing; and a step of treating thrombine.

Abstract translation: 目的：提供用于表达含有硫氧还蛋白作为融合配偶体的蛋白质的质粒，以容易地除去硫氧还蛋白并大量产生靶蛋白。 构成：pET-32-S（ - ）质粒含有用于插入硫氧还蛋白基因，凝血酶识别位点，S标签编码区和编码靶蛋白的基因的多克隆位点。 制备靶蛋白的方法包括：将编码靶蛋白的基因插入质粒的多克隆位点的步骤; 将质粒转化大肠杆菌并培养的步骤; 和治疗血栓的步骤。

公开(公告)号：KR100941679B1

公开(公告)日：2010-02-12

申请号：KR1020080001394

申请日：2008-01-04

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 안대로 ,  신동윤 ,  안희철

IPC: C07D203/00 ,  G01N33/533 ,  G01N33/53

Abstract: 본 발명은 인산기-선택적인 형광 프로브의 제조 방법에 관한 것으로서, 특히 특정 구조의 인산기 결합성 물질에 형광 물질을 공유 결합시킨 후, 생성 화합물을 금속
이온과 배위 결합시키는 것을 포함하는, 인산기-선택적인 형광 프로브의 제조 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따라 제조된 인산기-선택적인 형광 프로브는 포스파타제 활성 측정 방법에 유용하게 이용될 수 있다.
포스파타제 (phosphatase), 탈인산화 반응 (dephosphorylation), CIP (calf intestinal alkaline phosphatase), 형광 편광도 (fluorescence polarization), 인산기-선택적인 프로브 (phosphate-specific probe).

公开(公告)号：KR1020110034838A

公开(公告)日：2011-04-06

申请号：KR1020090092296

申请日：2009-09-29

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 신동윤 ,  안대로 ,  안희철

IPC: C07H21/02 ,  C07H21/04 ,  C12Q1/68 ,  G01N33/533

CPC classification number: C12Q1/6869 ,  C07H21/02 ,  C12Q2523/107 ,  C12Q2525/186 ,  C12Q2563/107 ,  G01N33/533

Abstract: PURPOSE: A DNA sequencing using a nucleoside triphosphate with a fluorescent 3'-O-blocking group is provided to sense fluorescence signal attached to 3'-hydroxyl group. CONSTITUTION: A nucleotide monomer contains a reversible fluorescence group conjugated to 3'-hydroxyl group of nucleoside triphosphate. The fluorescence group has a single fluorophore(FL), or a linker which connects the FL and 3'-hydroxyl group. A method for sequencing comprises: a step of synthesizing a nucleotide monomer; a step of polymerizing a template nucleic acid using the nucleotide monomer, DND or RNA polymerase to elongate a nucleotide to a primer; a step of recognizing elongated nucleotide base by sensing fluorescence signal; and a step of removing the fluorophore group conjugated to the 3'-hydroxyl group to recover 3'-OH.

Abstract translation: 目的：提供使用三磷酸核苷与荧光3'-O-阻断基团进行DNA测序，以检测与3'-羟基连接的荧光信号。 构成：核苷酸单体含有与三磷酸核苷3'-羟基结合的可逆荧光基团。 荧光基团具有单个荧光团（FL）或连接FL和3'-羟基的连接体。 一种测序方法包括：合成核苷酸单体的步骤; 使用核苷酸单体DND或RNA聚合酶聚合模板核酸以将核苷酸延伸至引物的步骤; 通过感测荧光信号识别细长核苷酸碱基的步骤; 以及除去与3'-羟基结合的荧光团以回收3'-OH的步骤。

公开(公告)号：KR1020090075514A

公开(公告)日：2009-07-08

申请号：KR1020080001394

申请日：2008-01-04

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 안대로 ,  신동윤 ,  안희철

IPC: C07D203/00 ,  G01N33/533 ,  G01N33/53

Abstract: A method for manufacturing phosphate-selective fluorescence probe is provided to sensitively measure the variation of low concentration and be useful in phosphatase activation measuring method. A phosphate-selective fluorescence probe by binding compound which is generated after covalent of fluorescence material with phosphate binding material of the chemical formulas 1 to 4 with metal ion through coordinate covalent bond. In the chemical formulas, R1 is amino, hydroxyl, thiol, carboxyl, carbonyl, vinyl or allyl group, R2 and R3 are ethyleneglycolyl ether (-(CH2O)n-)(n is integer less than 3), aliphatic hydrocarbon (-(CH2)m-)(m is integer less 3) or amide(-CONH-) group. The fluorescence material is fluorescein, tetramethylrhodamine, BODIPY, Alexa Fluor, Cy5, Cy3 or texas red. A method for analyzing the activation of phosphatase comprises: a step of mixing a phosphate-selective fluorescence probe with a substrate; a step of measuring the value of reaction solution containing a substrate; a step of adding phosphatase and measuring value after the reaction; and a step of comparing the value of pre-reaction solution and after the reaction.

Abstract translation: 提供磷酸选择性荧光探针的制造方法，以敏感地测量低浓度的变化，并且可用于磷酸酶活化测定方法。 磷酸盐选择性荧光探针，其通过化学式1至4的共价荧光材料与磷酸盐结合材料之间产生的化合物与金属离子通过配位共价键结合。 在化学式中，R1是氨基，羟基，硫醇，羧基，羰基，乙烯基或烯丙基，R2和R3是乙二醇酰基醚（ - （CH 2 O）n - ）（n是小于3的整数），脂族烃（ - （ CH2）m - ）（m为3以下的整数）或酰胺（-CONH-）基。 荧光物质是荧光素，四甲基罗丹明，BODIPY，Alexa Fluor，Cy5，Cy3或德克萨斯红。 用于分析磷酸酶活化的方法包括：将磷酸盐选择性荧光探针与底物混合的步骤; 测量含有底物的反应溶液的值的步骤; 反应后加入磷酸酶和测定值的步骤; 以及比较反应后溶液的值和反应后的步骤。

公开(公告)号：KR101107315B1

公开(公告)日：2012-01-20

申请号：KR1020090092296

申请日：2009-09-29

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 신동윤 ,  안대로 ,  안희철

IPC: C07H21/02 ,  C07H21/04 ,  C12Q1/68 ,  G01N33/533

CPC classification number: C12Q1/6869 ,  C12Q2563/107 ,  C12Q2525/186 ,  C12Q2523/107

Abstract: 본 발명은 3'-하이드록실기에 형광을 띄는 장애그룹이 부착된 뉴클레오시드 삼인산을 가역적 종결자로서 이용한 DNA 염기서열 분석 방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 3'-하이드록실기 부분에 형광신호를 내면서 화학적으로 제거가 가능한 가역적 장애그룹(reversible blocking group)을 부착한 새로운 뉴클레오티드 단량체인 단일 부분이 변형된 가역적 종결자(mono-modified reversible terminator, MRT)를 이용한 합성에 의한 염기서열 분석 방법(sequencing-by-synthesis)에 관한 것이다. 본 발명의 염기서열 분석 방법은 상기 새로운 뉴클레오티드 단량체가 염기서열 사슬의 연장을 중단시킴과 동시에 3'-하이드록실기 부분에 부착된 형광 신호를 감지함으로써 삽입된 염기의 종류를 분석할 수 있으며, 형광 신호 분석 이후 3'-하이드록실기에 부착된 장애그룹이 효과적으로 제거되어서 3'-OH 작용기로 복구되기 때문에 다음 단량체의 삽입을 가능하게 하여 연이어 염기서열 분석을 가능하게 한다.
DNA 염기서열 분석(DNA sequencing), 중합효소에 의한 염기서열 분 석(sequencing-by-synthesis), 3'-하이드록실기가 변형된 뉴클레오티드(3'-O-modified nucleotide), 형광(fluorescence), 가역적 종결자(reversible terminator).