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公开(公告)号：KR100218564B1
公开(公告)日：1999-10-01
申请号：KR1019970013911
申请日：1997-04-16
Applicant: 한국과학기술연구원
IPC: C07K14/635
Abstract: 본 발명은 효모로부터 인체 부갑상선 호르몬(human parathyroid gland hormone: hPTH)을 효율적으로 생산하는 방법에 관한 것으로, 본 발명에 따라 인체 부갑상선 호르몬을 발현할 수 있도록 형질전환된 효모 세포주를 아르기닌이 첨가된 배지에서 배양하면, 인체 부갑상선 호르몬의 분해를 최소화하여 완전한 형태의 인체 부갑상선 호르몬을 고수율로 수득할 수 있다.
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2.发明公开카복시펩티다제 Ｙ 프로펩타이드를 융합 파트너로 하여 대장균에서 폴리펩타이드를 발현하는 방법 및 이에 사용된 재조합 벡타 및 그 형질전환체 失效使用羧甲基纤维素作为混合合成者，重组载体及其所使用的转化体的来自E.COLI的多肽的代谢方法
公开(公告)号：KR1020000066750A
公开(公告)日：2000-11-15
申请号：KR1019990014065
申请日：1999-04-20
IPC: C07K19/00
CPC classification number: C07K14/395 , C07K2319/00 , C12N15/62 , C12N15/70 , C12Y304/16005
Abstract: PURPOSE: A novel confusion partner, the carboxypeptidase Y(CPY) propeptide for effective representation of polypeptide in E.coli, a recombinant vector and its transformed body are provided, by which small polypeptides(that is degradable easily in E.coli) can be produced stably. CONSTITUTION: A process for the preparation of novel confusion partner, the carboxypeptidase Y(CPY) propeptide, a recombinant vector and its transformed body comprises of: separating genomic DNA of Saccharomyces serebisiae, and processing PCR(Polymerase Chain Reaction) using the separated genomic DNA as a model chain(the primer used in this stage is synthesized by a DNA synthesizer); separating the cut fraction from agarose gel after cutting the fraction(fraction 1: 287 bp) gained by PCR with a restriction enzyme Nde I and Xho I, inserting into pET22b+ vector, and transforming to E.coli BL21(DE3) to represent; and inoculating the transformed E.coli and not-transformed E.coli to LB(yeast extract 0.5%, trypton 1%, NaCl 1%) liquid medium containing ampicillin, and confirming representation by adding IPTG(Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside) while culturing at 37°C. The CPY propeptide is existed in the form of non-soluble coagulated body, but is dissolved in urea easily.
Abstract translation: 目的：提供一种新颖的混淆对象，用于在大肠杆菌中有效表达多肽的羧肽酶Y（CPY）前体肽，重组载体及其转化体，通过其可以将小多肽（易于在大肠杆菌中降解）可以是 稳定生产。 构成：一种制备新的混淆配偶体的方法，羧肽酶Y（CPY）前肽，重组载体及其转化体包括：分离酵母菌的基因组DNA，并使用分离的基因组DNA进行PCR（聚合酶链式反应） 作为模型链（本阶段使用的引物由DNA合成仪合成）; 在用限制性内切酶Nde I和Xho I进行PCR后，切割通过PCR获得的级分（级分1：287bp），将切割的级分与琼脂糖凝胶分离，插入pET22b +载体中，并转化至大肠杆菌BL21（DE3） 并将转化的大肠杆菌和未转化的大肠杆菌接种到含有氨苄青霉素的LB（酵母提取物0.5％，1％，1％盐酸1％）液体培养基中，并通过加入IPTG（异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷） 同时在37℃培养。 CPY前肽以不溶性凝固体的形式存在，但易溶于尿素。
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3.发明授权카복시펩티다제 Ｙ 프로펩타이드를 융합 파트너로 하여 대장균에서 폴리펩타이드를 발현하는 방법 및 이에 사용된 재조합 벡타 및 그 형질전환체 失效使用羧肽酶Y前肽作为融合配偶体在大肠杆菌中表达多肽的方法使用的重组载体及其转化体
公开(公告)号：KR100305726B1
公开(公告)日：2001-09-24
申请号：KR1019990014065
申请日：1999-04-20
IPC: C07K19/00
Abstract: 본발명은대장균에서폴리펩타이드의효율적발현을위한새로운융합파트너 CPY(Carboxypeptidase Y) 프로펩타이드와재조합벡타및 그의형질전환체에관한것이다. 더욱자세하게는폴리펩타이드의분리정제를간단하게하기위해 CPY 프로펩타이드 N-말단에친화성태그를붙이고발현된융합폴리펩타이드로부터목적폴리펩타이드를얻기위해프로펩타이드 C-말단에화학적또는프로테아제에의한절단부위를도입한융합파트너에관한것이다. 유전자의발현에있어서, 진핵생물의활성단백질등을대장균등의원핵생물에발현시소형폴리펩타이드들은분해에쉽게노출되는위험을안고있다. 이러한문제점에대하여본 발명은상기융합파트너를이용함으로써대장균에서분해되기쉬운소형폴리펩타이드들을안정적으로생산할수 있다.
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公开(公告)号：KR1019980076978A
公开(公告)日：1998-11-16
申请号：KR1019970013911
申请日：1997-04-16
Applicant: 한국과학기술연구원
IPC: C07K14/635
Abstract: 본 발명은 효모로부터 인체 부갑상선 호르몬(human parathyroid gland hormone: hPTH)을 효율적으로 생산하는 방법에 관한 것으로, 본 발명에 따라 인체 부갑상선 호르몬을 발현할 수 있도록 형질전환된 효모 세포주를 아르기닌이 첨가된 배지에서 배양하면, 인체 부갑상선 호르몬의 분해를 최소화하여 완전한 형태의 인체 부갑상선 호르몬을 고수율로 수득할 수 있다.
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