公开(公告)号：KR100668044B1

公开(公告)日：2007-01-16

申请号：KR1020050058027

申请日：2005-06-30

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 유영숙 ,  송은주 ,  위문형 ,  슈레쉬바부

IPC: C12Q1/48 ,  C12N9/12

Abstract: 본 발명은 세포 내 키나제 활성화 정도의 측정방법에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 모세관 전기영동에 의한 Akt 키나제 활성 또는 활성 조절을 측정하기 위해 표적 기질 분자를 사용하는 키나제 분석방법으로, 사이토카인에 의해 자극된 PC12 세포에서 Akt 효소의 활성화 정도를 정확하고 정밀하며 신속하게 측정하기 위한 모세관 전기영동법을 이용한 세포 내 키나제 활성화 정도의 측정방법에 관한 것이다.
키나제, 활성화 정도, 측정방법, 모세관 전기영동, Akt

公开(公告)号：KR1020110114988A

公开(公告)日：2011-10-20

申请号：KR1020100034412

申请日：2010-04-14

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 송은주 ,  위문형 ,  유영숙

IPC: G01N33/541 ,  G01N33/561 ,  G01N33/533

Abstract: 본 발명은 세포 내 STAT1의 인산화 수준을 측정하는 방법에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 인산화된 STAT1을 인식하는 항체와 FITC가 결합된 2차 항체를 이용하여 사이토카인에 의해 자극된 세포에서 STAT1의 인산화 정도를 신속하게 측정하기 위한 세포 내 STAT1의 인산화 수준을 측정하는 방법에 관한 것이다.
이러한 본 발명의 세포 내 STAT1의 인산화 수준 측정 방법은 사이토카인에 의해 자극된 세포에서 STAT1 단백질의 인산화 정도와의 상대적 비교를 통하여 측정하고자 하는 세포의 인산화 수준을 신속하고 정밀하게 측정 가능하여 STAT1 이외의 다른 단백질들의 분석에도 적용 가능하고, 약물 개발 등에 유용하리라 기대된다.

公开(公告)号：KR101173027B1

公开(公告)日：2012-08-13

申请号：KR1020100034412

申请日：2010-04-14

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 송은주 ,  위문형 ,  유영숙

IPC: G01N33/541 ,  G01N33/561 ,  G01N33/533

Abstract: 본 발명은 세포 내 STAT1의 인산화 수준을 측정하는 방법에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 인산화된 STAT1을 인식하는 항체와 FITC가 결합된 2차 항체를 이용하여 사이토카인에 의해 자극된 세포에서 STAT1의 인산화 정도를 신속하게 측정하기 위한 세포 내 STAT1의 인산화 수준을 측정하는 방법에 관한 것이다.
이러한 본 발명의 세포 내 STAT1의 인산화 수준 측정 방법은 사이토카인에 의해 자극된 세포에서 STAT1 단백질의 인산화 정도와의 상대적 비교를 통하여 측정하고자 하는 세포의 인산화 수준을 신속하고 정밀하게 측정 가능하여 STAT1 이외의 다른 단백질들의 분석에도 적용 가능하고, 약물 개발 등에 유용하리라 기대된다.

公开(公告)号：KR1020070002474A

公开(公告)日：2007-01-05

申请号：KR1020050058027

申请日：2005-06-30

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 유영숙 ,  송은주 ,  위문형 ,  슈레쉬바부

IPC: C12Q1/48 ,  C12N9/12

CPC classification number: C12Q1/48 ,  C12Y207/11001

Abstract: A method for measuring activation levels of kinase in cells is provided to reduce the measuring costs, and improve measuring accuracy and rapidness by using capillary tube electrophoresis. The method for measuring activation levels of kinase in cells comprises the steps of: (1) treating the cells to be measured with cytokine; (2) adding a cell dissolving buffer solution containing beta-glycerophosphate, EGTA(ethylene glycol bis(b-aminoethylether) tetraacetic acid), EDTA(ethylenediamine tetraacetic acid), Na3VO4, DTT(dithiothreitol) and protein inhibitor into the cells; (3) centrifuging the cells to obtain the cell extract; (4) combining the cell extract with kinase(Akt) and ATP-Mg mixture; (5) reacting the mixture in kinase buffer at 25-35 deg. C for 10-30 minutes; (6) separating the resulting products into a substrate and reaction product by using UV-capillary tube electrophoresis; and (7) quantitavely measuring the separated substrate and reaction products, wherein the Akt substrate has the amino acid sequence of SEQ ID NO:1.

Abstract translation: 提供了一种测量细胞中激酶活化水平的方法，以减少测量成本，并通过使用毛细管电泳提高测量的准确性和快速性。 测定细胞激酶水平的方法包括以下步骤：（1）用细胞因子处理待测细胞; （2）向细胞中加入含有β-甘油磷酸酯，EGTA（乙二醇双（b-氨基乙醚）四乙酸），EDTA（乙二胺四乙酸），Na 3 VO 4，DTT（二硫苏糖醇）和蛋白质抑制剂的细胞溶解缓冲溶液; （3）离心细胞获得细胞提取物; （4）将细胞提取物与激酶（Akt）和ATP-Mg混合物组合; （5）使该混合物在25-35℃的激酶缓冲液中反应。 C 10-30分钟; （6）使用紫外 - 毛细管电泳将得到的产物分离成底物和反应产物; 和（7）定量测量分离的底物和反应产物，其中Akt底物具有SEQ ID NO：1的氨基酸序列。