公开(公告)号：KR100390769B1

公开(公告)日：2003-07-10

申请号：KR1020000063596

申请日：2000-10-27

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 김기선 ,  이덕연

IPC: C12N15/00

CPC classification number: C12N9/0036 ,  C07K14/195 ,  C07K14/245 ,  C12P21/02

Abstract: 본 발명은 단백질의 열안정화 방법에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 수용성 단백질의 표면에 있는 친수성 아미노산 잔기인 아스파르트산(aspartic acid)을 특이자리돌연변이(site-specific mutagenesis) 기법을 이용하여 글루탐산 (glutamic acid)으로 치환함으로써 열안정성을 높이는 단백질의 열안정화 방법에 관한 것이다. 따라서, 이러한 본 발명에 따르면 서로 유사한 정전기적 형질과 분자량을 지닌 친수성 아미노산이며 대부분 단백질의 표면에 존재하는 아스파르트산을 글루탐산으로 치환함으로써 단백질의 구조가 규명되어 있지 않은 상태에서도 단백질의 구조나 기능에 영향을 주지 않은 채 열안정성을 높일 수 있어 의료, 식품, 화학 등 단백질을 이용하는 각종 산업에 응용할 수 있는 효과가 있다.

Abstract translation: 本发明涉及通过位点特异性诱变用谷氨酸取代存在于水溶性蛋白质表面的亲水性氨基酸的天冬氨酸，提高蛋白质的热稳定性的方法。 存在于大多数蛋白质上的天冬氨酸（亲水性氨基酸）与谷氨酸（其在静电特征和分子量两者中与天冬氨酸非常相似）可以提高所得蛋白质的热稳定性而不影响其结构或功能 从而能够将其应用扩展到各种工业领域，例如医药，食品和化学。

公开(公告)号：KR1020020032878A

公开(公告)日：2002-05-04

申请号：KR1020000063596

申请日：2000-10-27

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 김기선 ,  이덕연

IPC: C12N15/00

CPC classification number: C12N9/0036 ,  C07K14/195 ,  C07K14/245 ,  C12P21/02

Abstract: PURPOSE: Provided is a method for thermostabilization of proteins without any change in the structure or function of the proteins. CONSTITUTION: The method for thermostabilization of proteins comprises substituting a hydrophilic residue, aspartic acid, with other hydrophilic residue, glutamic acid on the surface of a water-soluble protein using a site-specific mutagenesis. The site-specific mutagenesis comprises following steps: preparing a protein expression vector, wherein aspartic acids are substituted with glutamic acids using probes of SEQ ID NOs 9 to 14; transforming E. coli with the expression vector; cultivating E. coli transformant in a medium containing Ampicillin at 37 deg.C until the logarithm phase; adding isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside into the medium; and sequentially subjecting the cultured medium to nickel nitrilotriacetic acid-agarose affinity column, and DEAE-Sepharose and Superdex G75.

Abstract translation: 目的：提供蛋白质热稳定的方法，而蛋白质的结构或功能没有任何变化。 构成：蛋白质热稳定的方法包括使用位点特异性诱变将亲水残基，天冬氨酸与其他亲水性残基，水溶性蛋白质表面上的谷氨酸取代。 位点特异性诱变包括以下步骤：使用SEQ ID NO：9至14的探针制备蛋白质表达载体，其中天冬氨酸被谷氨酸取代; 用表达载体转化大肠杆菌; 在37℃下将含有氨苄青霉素的培养基中的大肠杆菌转化体培养至对数期; 向培养基中加入异丙基β-D-硫代吡喃半乳糖苷; 并依次将培养基培养至次氮基三乙酸 - 琼脂糖亲和柱，DEAE-Sepharose和Superdex G75。