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公开(公告)号：KR100829895B1
公开(公告)日：2008-05-19
申请号：KR1020060132116
申请日：2006-12-21
Applicant: 한국식품연구원
Abstract: A method for preparing vitellogenin is provided to minimize dying of a fish by decreasing stress applied to the fish and preventing necrosis and infection of wound occurring during breeding of the fish, thereby inducing the vitellogenin efficiently in the body of the fish and simplifying a purification step of the vitellogenin amplified into blood without using heparin. A method for preparing vitellogenin comprises the steps of: (a) after injecting an estrogen compound injection into an anesthetized fish and healing wound of an injection needle injected portion, breeding the fish to induce the vitellogenin; and (b) after adding a protease inhibitor to blood recovered from the vitellogenin induced fish, centrifuging the blood to obtain serum and subjecting the serum to anion exchange chromatography, wherein an anesthetic is ethyl 3-aminobenzoic acid, the estrogen compound is 17 beta-estradiol or 17 alpha-ethynyl estradiol, and the estrogen compound injection uses an edible oil or a mixture of methanol and chloroform in a volumetric ratio of 1:1. Further, the protease inhibitor comprises metallo, serine, sodium EDTA, 4-(2-aminoethyl)-benzenesulfonyl fluoride, E-64, leupeptin, aprotinin and bestatin.
Abstract translation: 提供了一种制备卵黄蛋白原的方法，以通过减少施加于鱼的压力并防止鱼繁殖期间发生的伤口的坏死和感染来最小化鱼的死亡，从而在鱼体内有效地诱导卵黄发生素并简化纯化步骤 的卵黄发生素在不使用肝素的情况下扩增成血液。 一种制备卵黄蛋白原的方法包括以下步骤：（a）将雌激素化合物注射注入麻醉的鱼中并注射注射针注射部分的愈合伤口后，养育鱼以诱导卵黄发生素; 和（b）在从卵黄蛋白原诱导的鱼回收的血液中加入蛋白酶抑制剂后，离心血液得血清，血清进行阴离子交换层析，其中麻醉剂为3-氨基苯甲酸乙酯，雌激素化合物为17β- 雌二醇或17α-乙炔基雌二醇，雌激素化合物注射剂以1：1的体积比使用食用油或甲醇和氯仿的混合物。 此外，蛋白酶抑制剂包括金属，丝氨酸，EDTA钠，4-（2-氨基乙基） - 苯磺酰氟，E-64，亮抑酶肽，抑肽酶和耐盐蛋白。
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公开(公告)号：KR1020110065799A
公开(公告)日：2011-06-16
申请号：KR1020090122460
申请日：2009-12-10
Applicant: 한국식품연구원
Abstract: PURPOSE: A method for preparing metallothionein(MT) which is a biomarker for heavy metal pollution is provided to detect pollution of fishes. CONSTITUTION: A method for preparing metallothionein(MT) comprises: a step of injecting a heavy metal salt solution to fishes; a step of treating heating wound at the infection site and growing the fishes to induce high concentration of metallothionein into the blood; a step of collecting blood from the fishes and adding protease inhibitor to obtain serum; and a step of performing anion exchange chromatography. The heavy metal is cadmium chloride or copper sulfate.
Abstract translation: 目的：提供金属硫蛋白（MT）的制备方法，该方法是重金属污染的生物标志物，用于检测鱼类的污染。 构成：制备金属硫蛋白（MT）的方法包括：将重金属盐溶液注入鱼类中的步骤; 在感染部位处理加热伤口并生长鱼类以诱导高浓度的金属硫蛋白进入血液的步骤; 从鱼中收集血液并加入蛋白酶抑制剂以获得血清的步骤; 和进行阴离子交换色谱的步骤。 重金属是氯化镉或硫酸铜。
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公开(公告)号：KR101142013B1
公开(公告)日：2012-05-17
申请号：KR1020090122460
申请日：2009-12-10
Applicant: 한국식품연구원
Abstract: 본 발명은 중금속에 노출된 어류체내에서 메탈로티오닌(metallothionein;MT) 유전자의 발현에 따라 MT가 증폭 생성되는 특성을 나타내므로 중금속의 양식어류 등 식용어류의 오염여부를 알아 내는데 유용한 생체지표(biomarker)로 사용될 수 있는 메탈로티오닌의 효율적인 제조방법에 관한 것이다.
본 발명에 의하면 어류의 마취 후 염화카드뮴 등 중금속 염의 고농도용액을 생리식염수에 녹여 주사한 후 적절한 위생관리를 통하여 어류가 폐사되지 않도록 하여 메탈로티오닌의 고농도 유도가 용이하게 이루어지도록 하고, 아울러 유도기간 중 어류체내에 유도된 메탈로티오닌을 회수하는 데에 있어서도 복잡한 해부과정을 거쳐 간(liver)과 아가미(gill) 등의 장기와 기관의 적출 및 이에 수반되는 균질화 추출과정을 거치지 않고 혈액을 채취하여 회수된 어류의 혈액내로 유도된 메탈로티오닌을 어류의 혈청으로부터 간편한 음이온교환 크로마토그래피 과정을 통하여 어종별 메탈로티오닌 항체제작 및 분석용 표준품으로서 사용가능할 정도로 간편하게 정제할 수 있다. 따라서 본 발명에서 제시한 메탈로티오닌의 효율적 제조방법은 양식어류 등 식용어류의 중금속 오염여부에 대한 생체지표 검색기술 개발에 필수적인 원천기반기술의 하나로서, 이 방법에 따른 산물로서 생산되는 어류 메탈로티오닌의 활용을 통하여 중금속오염 생체지표에 대한 면역센서와 효소면역분석법 등의 분석법 개발이 촉진되어질 수 있을 것으로 기대된다.
중금속오염, 생체지표, 메탈로티오닌, 식용어류
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