公开(公告)号：WO2014046484A1

公开(公告)日：2014-03-27

申请号：PCT/KR2013/008452

申请日：2013-09-17

Applicant: 한국표준과학연구원

Inventor： 최준혁 ,  김숙경 ,  김민지

IPC: C12N15/18 ,  C12N15/70 ,  C12N13/00 ,  C07K1/16

CPC classification number: C07K14/61 ,  B01D15/34 ,  B01D15/363 ,  B01D15/3823 ,  B01D15/426

Abstract: 본 발명은 재조합 인간성장호르몬(human growth hormone; hGH)의 발현, 추출 및 정제 방법에 관한 것으로, 구체적으로 대장균 시스템에서 단백질을 대량 생산 시, 불용성 봉입체(inclusion body) 형성을 최소화하는 세포 내 발현 방법과 추출하고자 하는 목적 단백질, 그 중에서도 특히, 인간성장호르몬의 추출과정에서 용해도를 최대화하며 생물학적 활성이 있고, 다량의 수득율로 획득될 수 있는 추출 및 정제 방법에 관한 것이다.

Abstract translation: 本发明涉及用于表达，提取和精制重组人生长激素（hGH）的方法。 更具体地说，本发明涉及能够在大肠杆菌系统中大规模生产蛋白质期间使不溶性包涵体形成最小化的细胞内表达方法。 本发明还涉及能够使提取目标蛋白质，特别是人生长激素时的溶解度最大化的提取精制方法，从而达到生物活性和高产率。

公开(公告)号：KR101527528B1

公开(公告)日：2015-06-19

申请号：KR1020120104252

申请日：2012-09-19

Applicant: 한국표준과학연구원

Inventor： 최준혁 ,  김숙경 ,  서경혜 ,  김민지

IPC: C12N15/18 ,  C12N15/70 ,  C12N13/00 ,  C07K1/16

CPC classification number: C07K14/61 ,  B01D15/34 ,  B01D15/363 ,  B01D15/3823 ,  B01D15/426

Abstract: 대장균()에서재조합단백질의대량생산에서생물학적으로활성이전혀없는봉입체(inclusion bodies)라불리는불용성응집물이형성된다. 따라서현재에이르기까지이러한불활성봉입체로부터재조합단백질을효과적으로추출및 정제하기위하여많은연구들이진행되었으나, 이러한방법들은종종재조합단백질의생물학적활성을저해한다. 이에본 발명에서는단백질생산 , 추출및 정제방법을최적화하여불용성봉입체형성을최소화하고재조합단백질, 특히인간성장호르몬의용해도를극대화하여높은수준의순도와수득율을갖는재조합단백질의세포내 생산방법을제공한다. 더욱이본 발명에서제공하는단백질생산, 추출및 정제방법이재조합단백질특히, 인간성장호르몬의생물학적활성의저해가전혀없다는것이특징이다. 단백질정제는통상의크로마토그래피법을이용하되태깅이없는인간성장호르몬의경우, 2 종류의음이온크로마토그래피방법을연속적으로적용하여효과적으로정제하였다. 본발명의단백질발현, 추출및 정제방법으로획득한인간성장호르몬은다양한분석기술(역상고성능액체크로마토그래피(Reverse Phase-High Performance Liquid Chromatography), 크기배제크로마토그래피(Size Exclusion Chromatography), 고분해능매트릭스보조레이저탈착비행시간질량분석기(Matrix-assisted Laser Desorption Ionization- Time of Flight Of Flight Mass Spectrometry, MADI-TOF), 원편광이색법(circular dichroism)을통해구조, 순도, 크기및 활성이모두분석되었다. 상기다양한분석들로부터상기인간성장호르몬의 2차구조와분자량을확인하였으며, 고순도로획득된인간성장호르몬은농도에의존적으로세포증식을촉진시키는것이확인되었다. 따라서본 발명의발현, 추출및 정제방법은불용성봉입체형성을최소화하면서단백질용해도를극대화하는하는동시에생물학적활성에는영향이없는조건에서재조합인간성장호르몬을순수분리하는것이특징이다.

公开(公告)号：KR1020140037726A

公开(公告)日：2014-03-27

申请号：KR1020120104252

申请日：2012-09-19

Applicant: 한국표준과학연구원

Inventor： 최준혁 ,  김숙경 ,  서경혜 ,  김민지

IPC: C12N15/18 ,  C12N15/70 ,  C12N13/00 ,  C07K1/16

CPC classification number: C07K14/61 ,  B01D15/34 ,  B01D15/363 ,  B01D15/3823 ,  B01D15/426

Abstract: 대장균()에서재조합단백질의대량생산에서생물학적으로활성이전혀없는봉입체(inclusion bodies)라불리는불용성응집물이형성된다. 따라서현재에이르기까지이러한불활성봉입체로부터재조합단백질을효과적으로추출및 정제하기위하여많은연구들이진행되었으나, 이러한방법들은종종재조합단백질의생물학적활성을저해한다. 이에본 발명에서는단백질생산 , 추출및 정제방법을최적화하여불용성봉입체형성을최소화하고재조합단백질, 특히인간성장호르몬의용해도를극대화하여높은수준의순도와수득율을갖는재조합단백질의세포내 생산방법을제공한다. 더욱이본 발명에서제공하는단백질생산, 추출및 정제방법이재조합단백질특히, 인간성장호르몬의생물학적활성의저해가전혀없다는것이특징이다. 단백질정제는통상의크로마토그래피법을이용하되태깅이없는인간성장호르몬의경우, 2 종류의음이온크로마토그래피방법을연속적으로적용하여효과적으로정제하였다. 본발명의단백질발현, 추출및 정제방법으로획득한인간성장호르몬은다양한분석기술(역상고성능액체크로마토그래피(Reverse Phase-High Performance Liquid Chromatography), 크기배제크로마토그래피(Size Exclusion Chromatography), 고분해능매트릭스보조레이저탈착비행시간질량분석기(Matrix-assisted Laser Desorption Ionization- Time of Flight Of Flight Mass Spectrometry, MADI-TOF), 원편광이색법(circular dichroism)을통해구조, 순도, 크기및 활성이모두분석되었다. 상기다양한분석들로부터상기인간성장호르몬의 2차구조와분자량을확인하였으며, 고순도로획득된인간성장호르몬은농도에의존적으로세포증식을촉진시키는것이확인되었다. 따라서본 발명의발현, 추출및 정제방법은불용성봉입체형성을최소화하면서단백질용해도를극대화하는하는동시에생물학적활성에는영향이없는조건에서재조합인간성장호르몬을순수분리하는것이특징이다.

Abstract translation: 本发明涉及可溶性重组蛋白的生产，提取和纯化方法，更具体地说，通过优化蛋白质生产，提取和纯化的方法，提供了具有高纯度和高产率的重组蛋白质的制备方法。 此外，蛋白质生产，提取和纯化的方法的特征在于不影响人生长激素的生物活性。 此外，本发明使不溶性包涵体的形成最小化，但是使蛋白质溶解度最大化，同时在不影响生物活性的条件下纯化分离重组人生长激素。