Abstract:
PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a new mutant or variant of s-GDH, having more significantly improved thermostability, and specific activity and affinity to glucose as compared with those of a mutant including a substitution at position 348 and having improved specificity.SOLUTION: This mutant of PQQ-dependent soluble glucose dehydrogenase (s-GDH; EC1. 1. 5. 2), has an improved specificity to glucose as compared to maltose and the substitution of threonine at position 348 by either glycine, alanine or serine, and further includes (a) at least one mutation for improving the stability of the mutant, (b) at least one mutation for improving the affinity of the mutant to the glucose and optionally (c) ≥1 mutation for further improving the specificity of the mutant to the glucose as compared to maltose, and their positions are corresponding to the amino acid positions known from the wild type sequence of A. calcoaceticus s-GDH (sequence number 2).
Abstract:
Una 3-hidroxibutirato deshidrogenasa (3-HBDH) mutante de Rhodobacter sphaeroides con un rendimiento mejorado en relación con la 3-HBDH natural en la que la enzima mutante comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 80 % idéntica a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 (3-HBDH de Rhodobacter sphaeroides; 3-HBDH natural) y en la que la enzima mutante tiene al menos una sustitución aminoacídica en relación con la 3-HBDH natural en una posición correspondiente a la posición 250 de SEQ ID NO: 1.
Abstract:
La presente invención da a conocer un mutante de la glucosa deshidrogenasa soluble dependiente de PQQ (s-GDH; EC 1.1.5.2) con especificidad mejorada por glucosa en comparación con maltosa que tiene una sustitución de treonina en la posición 348 por ya sea glicina, alanina o serina, en donde el mutante comprende adicionalmente por lo menos una mutación para mejorar la estabilidad del mutante y una o más mutaciones para mejorar la afinidad del mutante hacia glucosa y/o una o más mutaciones para mejorar adicionalmente la especificidad del mutante por glucosa en comparación con maltosa y en donde la posición 348 corresponde a las posiciones de aminoácidos a partir de la secuencia de tipo silvestre de s-GDH de A. calcoaceticus. También se dan a conocer genes que codifican esta s-GDH mutante y diferentes aplicaciones de estos mutantes de s-GDH, particularmente para determinar la concentración de glucosa en una muestra.
Abstract:
Un mutante de glucosa deshidrogenasa soluble dependiente de PQQ (s-GDH; EC 1.1.5.2) con especificidad mejorada por glucosa en comparación con maltosa, que tiene una sustitución de treonina en la posición 348 por glicina, alanina o bien serina, en el que dicho mutante comprende adicionalmente a) al menos una mutación para mejorar la estabilidad del mutante, b) al menos una mutación para mejorar la afinidad del mutante por glucosa, en el que dicha mutación para mejorar la afinidad por glucosa se selecciona del grupo que consiste en L110H o Y; N229A, G o S; Q246H, M o N; Y333A; G339T; 10 y V436P, y opcionalmente c) una o más mutaciones para mejorar además la especificidad del mutante por glucosa en comparación con maltosa, y en el que estas posiciones corresponden a las posiciones aminoacídicas conocidas de la secuencia natural de s-GDH de A. calcoaceticus (SEQ ID NO: 2).
Abstract:
The present invention discloses a mutant of PQQ-dependent soluble glucose dehydrogenase (s-GDH; EC 1.1.5.2) with improved specificity for glucose as compared to maltose, having a substitution of threonine at position 348 by either glycine, alanine or serine, wherein said mutant additionally comprises, at least one mutation for improving the stability of the mutant and one or more mutation(s) for improving the affinity of the mutant to glucose, and/or one or more mutation(s) for further improving the specificity of the mutant for glucose as compared to maltose, and wherein position 348 correspond to the amino acid positions known from the A. calcoaceticus s-GDH wild-type sequence. Also disclosed are genes encoding such mutant s-GDH, and different applications of these s-GDH mutants, particularly for determining the concentration of glucose in a sample.