一种DBAT突变酶R363H及其应用

    公开(公告)号:CN105602916B

    公开(公告)日:2018-10-16

    申请号:CN201610031523.1

    申请日:2016-01-15

    Abstract: 本发明公开一种DBAT突变酶R363H及其应用。所述的突变酶是氨基酸序列为SEQ ID NO:2的DBAT酶的第363位氨基酸由Arg改变为His;其氨基酸序列为SEQ ID NO:14。本发明成功构建出突变酶R363H。该突变酶在利用乙酰辅酶A的催化效率上比野生型酶提高了12倍,大大提高了乙酰辅酶A的使用率和产物巴卡亭Ⅲ的产量。同时,为降低生产成本,本发明寻找了7种新型酰基供体,突变酶均能高效利用这些酰基供体,其中对乙酸乙烯酯的利用率提高了100倍,能作为替代昂贵的乙酰辅酶A用于制备巴卡亭Ⅲ。迄今为止,在生物合成巴卡亭Ⅲ的研究中,并未发现有以非植物辅酶类为酰基供体并体现高利用率的研究。

    一种DBAT突变酶D166H及其应用

    公开(公告)号:CN105524893A

    公开(公告)日:2016-04-27

    申请号:CN201610029794.3

    申请日:2016-01-15

    CPC classification number: C12N9/1029 C12P17/02 C12Y203/01

    Abstract: 本发明公开一种DBAT突变酶D166H及其应用。所述的突变酶D166H是氨基酸序列为SEQ ID NO:2的DBAT酶的第166位氨基酸由Asp改变为His;其氨基酸序列为SEQ ID NO:6。该突变酶在利用乙酰辅酶A的催化效率上比野生型酶提高了11倍,大大提高了乙酰辅酶A的使用率和产物巴卡亭Ⅲ的产量。同时,为降低生产成本,本发明寻找了7种新型酰基供体,突变酶均能高效利用乙酸乙烯酯、乙酸戊酯和乙酸异丙烯酯,其中对乙酸乙烯酯的利用率提高了74倍,能作为替代昂贵的乙酰辅酶A底物用于制备巴卡亭Ⅲ。迄今为止,在生物合成巴卡亭Ⅲ的研究中,并未发现有以非植物辅酶类为酰基供体并体现高利用率的研究。

    一种DBAT突变酶R363H及其应用

    公开(公告)号:CN105602916A

    公开(公告)日:2016-05-25

    申请号:CN201610031523.1

    申请日:2016-01-15

    CPC classification number: C12N9/1029 C12P17/02 C12Y203/01167

    Abstract: 本发明公开一种DBAT突变酶R363H及其应用。所述的突变酶是氨基酸序列为SEQ ID NO:2的DBAT酶的第363位氨基酸由Arg改变为His;其氨基酸序列为SEQ ID NO:14。本发明成功构建出突变酶R363H。该突变酶在利用乙酰辅酶A的催化效率上比野生型酶提高了12倍,大大提高了乙酰辅酶A的使用率和产物巴卡亭Ⅲ的产量。同时,为降低生产成本,本发明寻找了7种新型酰基供体,突变酶均能高效利用这些酰基供体,其中对乙酸乙烯酯的利用率提高了100倍,能作为替代昂贵的乙酰辅酶A用于制备巴卡亭Ⅲ。迄今为止,在生物合成巴卡亭Ⅲ的研究中,并未发现有以非植物辅酶类为酰基供体并体现高利用率的研究。

    乙酸酐作为酰基供体在参与DBAT酶促反应中的应用

    公开(公告)号:CN108841888B

    公开(公告)日:2021-05-28

    申请号:CN201810856906.1

    申请日:2018-07-31

    Abstract: 本发明公开一种乙酸酐作为酰基供体在参与DBAT酶促反应中的应用,属于生物分子催化领域。本发明利用乙酸酐作为酰基供体可替代昂贵的天然底物乙酰CoA参与DBAT酶促反应,以乙酸酐作为酰基供体参与酶促反应下的DBAT酶活力比乙酰CoA提高了2.2倍;对于后续巴卡亭Ⅲ和紫杉醇的体外酶促合成以及在紫杉醇代谢合成通路中的应用都具有重大意义,可极大的降低其工业应用成本,带来巨大的经济价值。

    一种DBAT突变酶D166HR363H及其应用

    公开(公告)号:CN105524892A

    公开(公告)日:2016-04-27

    申请号:CN201610028306.7

    申请日:2016-01-15

    CPC classification number: C12N9/1029 C12N2800/101 C12P17/02

    Abstract: 本发明公开一种DBAT突变酶D166HR363H及其应用。该突变酶是氨基酸序列为SEQ ID NO:2的DBAT酶的第166位氨基酸由Asp变为His,第363位氨基酸由Arg变为His;其氨基酸序列为SEQ ID NO:8。该突变酶在利用乙酰辅酶A的催化效率上比野生型酶提高了39倍,大大提高了乙酰辅酶A的使用率和产物巴卡亭Ⅲ的产量。同时,为降低生产成本,本发明寻找了7种廉价的酰基供体,突变酶均能高效利用这些酰基供体,其中对乙酸乙烯酯的利用率提高了143倍,能作为替代昂贵的乙酰辅酶A用于制备巴卡亭Ⅲ。迄今为止,在生物合成巴卡亭Ⅲ的研究中,并未发现有以非植物辅酶类为酰基供体并体现高利用率的研究。

    一种DBAT突变酶D166HR363H及其应用

    公开(公告)号:CN105524892B

    公开(公告)日:2019-01-08

    申请号:CN201610028306.7

    申请日:2016-01-15

    Abstract: 本发明公开一种DBAT突变酶D166HR363H及其应用。该突变酶是氨基酸序列为SEQ ID NO:2的DBAT酶的第166位氨基酸由Asp变为His,第363位氨基酸由Arg变为His;其氨基酸序列为SEQ ID NO:8。该突变酶在利用乙酰辅酶A的催化效率上比野生型酶提高了39倍,大大提高了乙酰辅酶A的使用率和产物巴卡亭Ⅲ的产量。同时,为降低生产成本,本发明寻找了7种廉价的酰基供体,突变酶均能高效利用这些酰基供体,其中对乙酸乙烯酯的利用率提高了143倍,能作为替代昂贵的乙酰辅酶A用于制备巴卡亭Ⅲ。迄今为止,在生物合成巴卡亭Ⅲ的研究中,并未发现有以非植物辅酶类为酰基供体并体现高利用率的研究。

    一种DBAT突变酶D166H及其应用

    公开(公告)号:CN105524893B

    公开(公告)日:2019-01-08

    申请号:CN201610029794.3

    申请日:2016-01-15

    Abstract: 本发明公开一种DBAT突变酶D166H及其应用。所述的突变酶D166H是氨基酸序列为SEQ ID NO:2的DBAT酶的第166位氨基酸由Asp改变为His;其氨基酸序列为SEQ ID NO:6。该突变酶在利用乙酰辅酶A的催化效率上比野生型酶提高了11倍,大大提高了乙酰辅酶A的使用率和产物巴卡亭Ⅲ的产量。同时,为降低生产成本,本发明寻找了7种新型酰基供体,突变酶均能高效利用乙酸乙烯酯、乙酸戊酯和乙酸异丙烯酯,其中对乙酸乙烯酯的利用率提高了74倍,能作为替代昂贵的乙酰辅酶A底物用于制备巴卡亭Ⅲ。迄今为止,在生物合成巴卡亭Ⅲ的研究中,并未发现有以非植物辅酶类为酰基供体并体现高利用率的研究。

    乙酸酐作为酰基供体在参与DBAT酶促反应中的应用

    公开(公告)号:CN108841888A

    公开(公告)日:2018-11-20

    申请号:CN201810856906.1

    申请日:2018-07-31

    Abstract: 本发明公开一种乙酸酐作为酰基供体在参与DBAT酶促反应中的应用,属于生物分子催化领域。本发明利用乙酸酐作为酰基供体可替代昂贵的天然底物乙酰CoA参与DBAT酶促反应,以乙酸酐作为酰基供体参与酶促反应下的DBAT酶活力比乙酰CoA提高了2.2倍;对于后续巴卡亭Ⅲ和紫杉醇的体外酶促合成以及在紫杉醇代谢合成通路中的应用都具有重大意义,可极大的降低其工业应用成本,带来巨大的经济价值。

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