公开(公告)号：CN119372233A

公开(公告)日：2025-01-28

申请号：CN202411557658.2

申请日：2024-11-04

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 牛欢青 ,  冷静 ,  应汉杰 ,  杨晟 ,  蒋宇 ,  孙兵兵 ,  杨俊杰 ,  杨思琪 ,  李梦婷 ,  柳东 ,  陈勇

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/54 ,  C12N15/56 ,  C12N15/53 ,  C12N15/61 ,  C12N15/60 ,  C12N1/21 ,  C12P19/00 ,  C12P19/14 ,  C12P19/18 ,  C12P19/24 ,  A23L33/135 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种高效合成2′‑岩藻糖基乳糖的基因工程菌及其构建方法与应用，本发明在模块化代谢工程改造策略的基础上结合CRISPR‑转座技术，将2′‑岩藻糖基乳糖合成途径中的岩藻糖模块基因和糖基转移酶模块基因进行基因组整合，构建了用于合成2′‑岩藻糖基乳糖的多拷贝菌株库，最终获得了多个高效合成2′‑岩藻糖基乳糖的整合型表达菌株。相较于质粒型表达菌株，整合型表达菌株产量更高、稳定性更好。葡萄糖激酶编码基因glk或丙酮酸氧化酶编码基因poxB的敲除或中断能进一步提升产量，其中glk中断菌株DH1W6G6 glk::VerA的单位细胞产量为5.14g/g DCW，2′‑岩藻糖基乳糖相对于乳糖的收率达0.991mol/mol，为现阶段以大肠杆菌为底盘整合型菌株的最高值，具备良好的工业化前景。

公开(公告)号：CN104774799B

公开(公告)日：2018-01-30

申请号：CN201510184705.8

申请日：2015-04-17

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 应汉杰 ,  王骏之 ,  刘映淼 ,  杨晟 ,  陶荣盛 ,  蒋宇

IPC: C12N1/21 ,  C12N1/19 ,  C12N15/70 ,  C12N15/81 ,  C12N15/54 ,  C12P39/00 ,  C12P19/30 ,  C12R1/19 ,  C12R1/865

Abstract: 本发明公开了一株表达胆碱激酶及磷酰胆碱胞苷转移酶的基因工程菌，属于基因工程技术领域。该菌株是导入了磷酰胆碱胞苷转移酶CCT基因和胆碱激酶CKI基因共表达质粒的基因工程菌，所述的CCT基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1中1～1275所示；所述的CKI基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1中1276～3024所示。本发明的大肠杆菌基因工程菌株可以高效表达胆碱激酶，其诱导酶活达1.94U/mg。本发明还公开了上述基因工程菌的构建方法及利用该基因工程菌催化产胞磷胆碱的应用，催化体系中胞磷胆碱的含量达到19g/L。将该菌株应用于生产胞磷胆碱，具有工艺简单、条件温和、周期短、副产物少等优点。

公开(公告)号：CN104774799A

公开(公告)日：2015-07-15

申请号：CN201510184705.8

申请日：2015-04-17

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 应汉杰 ,  王骏之 ,  刘映淼 ,  杨晟 ,  陶荣盛 ,  蒋宇

IPC: C12N1/21 ,  C12N1/19 ,  C12N15/70 ,  C12N15/81 ,  C12N15/54 ,  C12P39/00 ,  C12P19/30 ,  C12R1/19 ,  C12R1/865

Abstract: 本发明公开了一株表达胆碱激酶及磷酰胆碱胞苷转移酶的基因工程菌，属于基因工程技术领域。该菌株是导入了磷酰胆碱胞苷转移酶CCT基因和胆碱激酶CKI基因共表达质粒的基因工程菌，所述的CCT基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1中1～1275所示；所述的CKI基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1中1276～3024所示。本发明的大肠杆菌基因工程菌株可以高效表达胆碱激酶，其诱导酶活达1.94U/mg。本发明还公开了上述基因工程菌的构建方法及利用该基因工程菌催化产胞磷胆碱的应用，催化体系中胞磷胆碱的含量达到19g/L。将该菌株应用于生产胞磷胆碱，具有工艺简单、条件温和、周期短、副产物少等优点。