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公开(公告)号：CN1865430A
公开(公告)日：2006-11-22
申请号：CN200510013514.1
申请日：2005-05-16
Applicant: 南开大学
Abstract: 本发明公开了一种高产促胰岛素激素毕赤酵母(Pichia pastoris)工程菌及其构建方法。本发明运用分子生物学技术先构建毕赤酵母(P.pastoris)表达载体pPIC9GLP－1，然后将其线性化后转化进入毕赤酵母GS115中，从而获得能够高效分泌表达促胰岛素激素的毕赤酵母工程菌，该工程菌的促胰岛素激素产量可达到100mg/L。同时，利用该高产工程菌生产的促胰岛素激素产品，其氨基酸序列不同于天然产品，且已被消除了胰蛋白酶切位点，因此不仅在体内不会被特异性的蛋白酶降解而能够长时间的保持活性，而且由于不会被胰蛋白酶降解，还可以制成口服制剂使用。
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公开(公告)号：CN100529084C
公开(公告)日：2009-08-19
申请号：CN200610014589.6
申请日：2006-07-03
Applicant: 南开大学
Abstract: 由于根霉葡萄糖淀粉酶具有100%降解生淀粉以及降解产物中非发酵性糖类少的优点，在酒精发酵工业中具有十分重要的应用价值。本发明首次从少根根霉中成功地克隆了少根根霉葡萄糖淀粉酶基因(RAGA)，并通过PCR技术人工剪除其内含子，构建了可在不同宿主中高效表达的RAGA基因。将本发明中的RAGA基因克隆到pPIC9表达载体，转化毕赤酵母，获得的工程菌株表达了有活性的葡萄糖淀粉酶蛋白。本发明的内含子人工剪接方法简便易行，准确可靠，为难以通过RT-PCR方法和cDNA文库技术克隆基因编码序列而易于获得其基因组DNA时人工剪除内含子，获得可在不同宿主中表达的基因开辟了一条新的途径。
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公开(公告)号：CN1900288A
公开(公告)日：2007-01-24
申请号：CN200610014589.6
申请日：2006-07-03
Applicant: 南开大学
Abstract: 由于根霉葡萄糖淀粉酶具有100％降解生淀粉以及降解产物中非发酵性糖类少的优点，在酒精发酵工业中具有十分重要的应用价值。本发明首次从少根根霉中成功地克隆了少根根霉葡萄糖淀粉酶基因(RAGA)，并通过PCR技术人工剪除其内含子，构建了可在不同宿主中高效表达的RAGA基因。将本发明中的RAGA基因克隆到pPIC9表达载体，转化毕赤酵母，获得的工程菌株表达了有活性的葡萄糖淀粉酶蛋白。本发明的内含子人工剪接方法简便易行，准确可靠，为难以通过RT－PCR方法和cDNA文库技术克隆基因编码序列而易于获得其基因组DNA时人工剪除内含子，获得可在不同宿主中表达的基因开辟了一条新的途径。
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公开(公告)号：CN100497591C
公开(公告)日：2009-06-10
申请号：CN200510013514.1
申请日：2005-05-16
Applicant: 南开大学
Abstract: 本发明公开了一种高产促胰岛素激素毕赤酵母(Pichia pastoris)工程菌及其构建方法。本发明运用分子生物学技术先构建毕赤酵母(P.pastoris)表达载体pPIC9GLP-1，然后将其线性化后转化进入毕赤酵母GS115中，从而获得能够高效分泌表达促胰岛素激素的毕赤酵母工程菌，该工程菌的促胰岛素激素产量可达到100mg/L。同时，利用该高产工程菌生产的促胰岛素激素产品，其氨基酸序列不同于天然产品，且已被消除了胰蛋白酶切位点，因此不仅在体内不会被特异性的蛋白酶降解而能够长时间的保持活性，而且由于不会被胰蛋白酶降解，还可以制成口服制剂使用。
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