-
公开(公告)号：CN103382482A
公开(公告)日：2013-11-06
申请号：CN201210132963.8
申请日：2012-05-03
Applicant: 南开大学
Abstract: 本发明描述了一种食用安全性整合型螺旋藻高效表达载体p21GZ-GAG的构建方法及应用技术。该载体含有GFP标签、螺旋藻特异性启动子和10拷贝促胰岛素GLP-1基因。通过去除自杀质粒pSZ21中Tn5转座单元的抗生素基因构建载体p21GZ；分别克隆GFP、螺旋藻特异启动子AP以及10拷贝促胰岛素GLP-1基因，并串联连接成表达单元GAG，将其插入p21GZ获得p21GZ-GAG。该载体保留了其自杀型质粒和Tn5介导的转座整合能力，可将表达单元GAG整合进螺旋藻基因组，通过螺旋藻特异启动子AP启动GLP-1的表达；剔除抗性标记而通过GFP进行筛选，保证其食用安全性，可研发防治糖尿病的保健品。
-
公开(公告)号：CN101824388A
公开(公告)日：2010-09-08
申请号：CN200910068037.7
申请日：2009-03-06
Applicant: 南开大学
IPC: C12N1/19 , C12N15/81 , A61K36/064 , A61P3/10 , C12R1/865
Abstract: 本发明描述了一种糖尿病食疗酵母及其构建方法。该重组酵母是以酿酒酵母基因组DNA为模板扩增两段rDNA序列；以pYX212为模板扩增营养标记基因URA3和磷酸丙糖异构酶启动子驱动的表达盒片段；将四个扩增产物分别克隆到pUC18的相应位点，得到整合型载体pNK1。再利用DNA合成点突变技术除去天然GLP-1分子中的二肽酶VI和胰蛋白酶的酶切位点，合成I、II型和左右连接补平引物片段，用分步退火一步连接法获得十拷贝串联rolGLP-1序列并将之克隆到pNK1中得到pNK-GLP。然后线性化pNK-GLP并转化酿酒酵母BJ2407，筛选得到重组酵母SG2。因rolGLP-1基因整合于酵母染色体中，该重组菌株具有稳定高效表达rolGLP-1的特性和降低高血糖大鼠血糖水平的功能，可用于开发治疗糖尿病的酵母生物药物。
-
公开(公告)号：CN100529084C
公开(公告)日：2009-08-19
申请号：CN200610014589.6
申请日：2006-07-03
Applicant: 南开大学
Abstract: 由于根霉葡萄糖淀粉酶具有100%降解生淀粉以及降解产物中非发酵性糖类少的优点，在酒精发酵工业中具有十分重要的应用价值。本发明首次从少根根霉中成功地克隆了少根根霉葡萄糖淀粉酶基因(RAGA)，并通过PCR技术人工剪除其内含子，构建了可在不同宿主中高效表达的RAGA基因。将本发明中的RAGA基因克隆到pPIC9表达载体，转化毕赤酵母，获得的工程菌株表达了有活性的葡萄糖淀粉酶蛋白。本发明的内含子人工剪接方法简便易行，准确可靠，为难以通过RT-PCR方法和cDNA文库技术克隆基因编码序列而易于获得其基因组DNA时人工剪除内含子，获得可在不同宿主中表达的基因开辟了一条新的途径。
-
公开(公告)号：CN1900288A
公开(公告)日：2007-01-24
申请号：CN200610014589.6
申请日：2006-07-03
Applicant: 南开大学
Abstract: 由于根霉葡萄糖淀粉酶具有100％降解生淀粉以及降解产物中非发酵性糖类少的优点，在酒精发酵工业中具有十分重要的应用价值。本发明首次从少根根霉中成功地克隆了少根根霉葡萄糖淀粉酶基因(RAGA)，并通过PCR技术人工剪除其内含子，构建了可在不同宿主中高效表达的RAGA基因。将本发明中的RAGA基因克隆到pPIC9表达载体，转化毕赤酵母，获得的工程菌株表达了有活性的葡萄糖淀粉酶蛋白。本发明的内含子人工剪接方法简便易行，准确可靠，为难以通过RT－PCR方法和cDNA文库技术克隆基因编码序列而易于获得其基因组DNA时人工剪除内含子，获得可在不同宿主中表达的基因开辟了一条新的途径。
-
公开(公告)号：CN1733902A
公开(公告)日：2006-02-15
申请号：CN200510014305.9
申请日：2005-07-01
Applicant: 南开大学
Abstract: 一种植酸酶分泌型转基因芽孢杆菌菌株NKTS，属于生物技术领域。植酸是土壤中磷的主要存在方式，但必须被植酸酶分解后才能被植物吸收利用。作为一种微生物肥料的硅酸盐细菌不分泌植酸酶，限制了它的应用。本发明将一个植酸酶分泌表达元件插入到转座子载体pSZ21的mini－Tn5之内，构建成植酸酶分泌表达载体pSP43，首次通过基因枪的方法成功地将其转化到硅酸盐细菌内，构建了一个多功能的工程菌。弥补了野生芽孢杆菌不能分泌植酸酶、分解土壤有机磷的缺陷。转基因芽胞杆菌发酵液的增产效果最好，比对照增产24.4％。与草炭混合的工程菌粉剂的增产效果次之，比对照增产19.5％，节约磷肥效果达到30％，节约钾肥效果达到20％。
-
Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104178496A
公开(公告)日：2014-12-03
申请号：CN201310200002.0
申请日：2013-05-27
Applicant: 南开大学
Abstract: 本发明描述了一种植物低磷应答调控单元PSS(PHR1-35S-SIZ1)表达载体pX6-PHR1-35S-SIZ1的构建技术。该表达载体的构建方法是，从拟南芥中克隆得到SIZ1基因，将35S启动子插入到SIZ1基因的上游，构建35S-SIZ1表达单元，将该表达单元插入植物表达载体pX6，构建载体pX6-35S-SIZ1，再将PHR1基因插入该载体中，得到表达载体pX6-PHR1-35S-SIZ1。用表达载体pX6-PHR1-35S-SIZ1转化农杆菌GV3101，得到同时含有PHR1基因和SIZ1基因的工程农杆菌菌株NK-314。
-
公开(公告)号：CN1865430A
公开(公告)日：2006-11-22
申请号：CN200510013514.1
申请日：2005-05-16
Applicant: 南开大学
Abstract: 本发明公开了一种高产促胰岛素激素毕赤酵母(Pichia pastoris)工程菌及其构建方法。本发明运用分子生物学技术先构建毕赤酵母(P.pastoris)表达载体pPIC9GLP－1，然后将其线性化后转化进入毕赤酵母GS115中，从而获得能够高效分泌表达促胰岛素激素的毕赤酵母工程菌，该工程菌的促胰岛素激素产量可达到100mg/L。同时，利用该高产工程菌生产的促胰岛素激素产品，其氨基酸序列不同于天然产品，且已被消除了胰蛋白酶切位点，因此不仅在体内不会被特异性的蛋白酶降解而能够长时间的保持活性，而且由于不会被胰蛋白酶降解，还可以制成口服制剂使用。
-
公开(公告)号：CN112029785A
公开(公告)日：2020-12-04
申请号：CN201910475504.1
申请日：2019-06-03
Applicant: 南开大学
Abstract: 本发明涉及一种生产降糖抗栓肽(5rolGLP-1-NK)工程菌的构建、制备方法和应用技术。将可防治2型糖尿病的口服长效促胰岛素(rolGLP-1)和防治其血栓并发症的纳豆激酶(NK)融合，使其具有防治糖尿病及其血栓并发症的双重功能。具体是应用基因工程技术获得rolGLP-1和NK的融合基因5rolGLP-1-NK，构建其表达载体pET-22b(+)-5rolGLP-1-NK并转化大肠杆菌，筛选获得高效表达5rolGLP-1-NK的工程菌BL21(DE3)-5rolGLP-1-NK。该菌株通过诱导表达和纯化可获得高纯度5rolGLP-1-NK。尾部血栓模型小鼠灌胃5rolGLP-1-NK，可显著减缓其尾部血栓出现的时间和程度；糖尿病模型小鼠灌胃5rolGLP-1-NK，可明显降低血糖水平并改善糖尿病症状，因此，本发明可用于开发同时治疗糖尿病及其血栓并发症的双功能降糖抗栓肽药物。
-
公开(公告)号：CN101824423A
公开(公告)日：2010-09-08
申请号：CN200910068036.2
申请日：2009-03-06
Applicant: 南开大学
Abstract: 一种融合基因GAD-GLP-1和糖尿病食疗型黄瓜的培育方法。本发明提供的融合基因GAD-GLP-1如序列表所示，包含一段谷氨酸脱羧酶基因GAD和一段胰高血糖素样肽-1基因GLP-1，两个基因之间通过EcoRV位点进行连接，在EcoRV位点的两侧分别添加了两个赖氨酸，这四个氨基酸同时起到连接肽的作用。本发明将克隆载体pMD-GAD-GLP-1中的融合基因用BamHI和SalI酶切回收后连入Marker-free植物表达载体pX6中，构建得到无选择性标记的植物表达载体pX6-GAD-GLP-1，并转化到农杆菌LBA4404中构建成工程菌株。本发明通过农杆菌介导法，将GAD-GLP-1融合基因成功地转化到黄瓜自交系2M1，并获得了稳定表达GAD-GLP-1融合蛋白的转基因植株。糖尿病模型大鼠灌胃本发明提供的转基因黄瓜后，可以降低其血糖水平并改善其糖尿病症状。
-
公开(公告)号：CN102839185B
公开(公告)日：2014-06-25
申请号：CN201110166533.3
申请日：2011-06-21
Applicant: 南开大学
IPC: C12N15/62 , C12N15/63 , C12N15/70 , C12N1/21 , C07K19/00 , A61K38/58 , A61P3/10 , A61P7/02 , C12R1/19 , A61K38/26
Abstract: 本发明涉及一种生产治疗糖尿病及血栓并发症的双功能药物(rolGLP-HV)工程菌的构建、制备方法和应用技术。将对2型糖尿病具有“治标治本”疗效的长效促胰岛素rolGLP-1与有效防治其心脑血管并发症的水蛭素rHV1融合，使其具有预防和治疗糖尿病及血栓并发症的双重功能。具体来说，应用基因工程技术获得rolGLP-1和rHV1的融合基因rolGLP-HV，并将其克隆到大肠杆菌表达载体pET22b(+)，构建表达载体pNK-EC-rolGLP-HV，转化大肠杆菌，获得高表达rolGLP-HV的工程菌NK-rolGLP-HV-E007。该菌株通过诱导表达和纯化可获得高纯度rolGLP-HV。胡氏血栓模型小鼠灌胃rolGLP-HV，可显著减缓其尾部血栓出现的时间和程度；糖尿病模型小鼠灌胃rolGLP-HV，可明显降低血糖水平并改善糖尿病症状，因此，本发明可用于开发同时治疗糖尿病及其血栓并发症的双功能药物。
-
-
-
-
-
-
-
-
-
Search Results
12
records
(took 0.028 seconds)
