公开(公告)号：CN1865430A

公开(公告)日：2006-11-22

申请号：CN200510013514.1

申请日：2005-05-16

Applicant: 南开大学

Inventor： 李明刚 ,  侯建华 ,  方园园 ,  薄涛 ,  王翠艳 ,  杨少辉 ,  武志强 ,  闫瑞香

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C12N15/66 ,  C12N15/10 ,  C07H21/00 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明公开了一种高产促胰岛素激素毕赤酵母(Pichia pastoris)工程菌及其构建方法。本发明运用分子生物学技术先构建毕赤酵母(P.pastoris)表达载体pPIC9GLP－1，然后将其线性化后转化进入毕赤酵母GS115中，从而获得能够高效分泌表达促胰岛素激素的毕赤酵母工程菌，该工程菌的促胰岛素激素产量可达到100mg/L。同时，利用该高产工程菌生产的促胰岛素激素产品，其氨基酸序列不同于天然产品，且已被消除了胰蛋白酶切位点，因此不仅在体内不会被特异性的蛋白酶降解而能够长时间的保持活性，而且由于不会被胰蛋白酶降解，还可以制成口服制剂使用。

公开(公告)号：CN100497591C

公开(公告)日：2009-06-10

申请号：CN200510013514.1

申请日：2005-05-16

Applicant: 南开大学

Inventor： 李明刚 ,  侯建华 ,  方园园 ,  薄涛 ,  王翠艳 ,  杨少辉 ,  武志强 ,  闫瑞香

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C12N15/66 ,  C12N15/10 ,  C07K14/575 ,  C07H21/00 ,  C12R1/84 ,  C12P21/02

Abstract: 本发明公开了一种高产促胰岛素激素毕赤酵母(Pichia pastoris)工程菌及其构建方法。本发明运用分子生物学技术先构建毕赤酵母(P.pastoris)表达载体pPIC9GLP-1，然后将其线性化后转化进入毕赤酵母GS115中，从而获得能够高效分泌表达促胰岛素激素的毕赤酵母工程菌，该工程菌的促胰岛素激素产量可达到100mg/L。同时，利用该高产工程菌生产的促胰岛素激素产品，其氨基酸序列不同于天然产品，且已被消除了胰蛋白酶切位点，因此不仅在体内不会被特异性的蛋白酶降解而能够长时间的保持活性，而且由于不会被胰蛋白酶降解，还可以制成口服制剂使用。

公开(公告)号：CN101824388A

公开(公告)日：2010-09-08

申请号：CN200910068037.7

申请日：2009-03-06

Applicant: 南开大学

Inventor： 李明刚 ,  武志强 ,  赵磊 ,  廖芳 ,  李娜 ,  马百成 ,  胡晓宇 ,  王维婧 ,  卫一鸣 ,  陈苗 ,  王瑞菊

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  A61K36/064 ,  A61P3/10 ,  C12R1/865

Abstract: 本发明描述了一种糖尿病食疗酵母及其构建方法。该重组酵母是以酿酒酵母基因组DNA为模板扩增两段rDNA序列；以pYX212为模板扩增营养标记基因URA3和磷酸丙糖异构酶启动子驱动的表达盒片段；将四个扩增产物分别克隆到pUC18的相应位点，得到整合型载体pNK1。再利用DNA合成点突变技术除去天然GLP-1分子中的二肽酶VI和胰蛋白酶的酶切位点，合成I、II型和左右连接补平引物片段，用分步退火一步连接法获得十拷贝串联rolGLP-1序列并将之克隆到pNK1中得到pNK-GLP。然后线性化pNK-GLP并转化酿酒酵母BJ2407，筛选得到重组酵母SG2。因rolGLP-1基因整合于酵母染色体中，该重组菌株具有稳定高效表达rolGLP-1的特性和降低高血糖大鼠血糖水平的功能，可用于开发治疗糖尿病的酵母生物药物。