公开(公告)号：CN101824388A

公开(公告)日：2010-09-08

申请号：CN200910068037.7

申请日：2009-03-06

Applicant: 南开大学

Inventor： 李明刚 ,  武志强 ,  赵磊 ,  廖芳 ,  李娜 ,  马百成 ,  胡晓宇 ,  王维婧 ,  卫一鸣 ,  陈苗 ,  王瑞菊

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  A61K36/064 ,  A61P3/10 ,  C12R1/865

Abstract: 本发明描述了一种糖尿病食疗酵母及其构建方法。该重组酵母是以酿酒酵母基因组DNA为模板扩增两段rDNA序列；以pYX212为模板扩增营养标记基因URA3和磷酸丙糖异构酶启动子驱动的表达盒片段；将四个扩增产物分别克隆到pUC18的相应位点，得到整合型载体pNK1。再利用DNA合成点突变技术除去天然GLP-1分子中的二肽酶VI和胰蛋白酶的酶切位点，合成I、II型和左右连接补平引物片段，用分步退火一步连接法获得十拷贝串联rolGLP-1序列并将之克隆到pNK1中得到pNK-GLP。然后线性化pNK-GLP并转化酿酒酵母BJ2407，筛选得到重组酵母SG2。因rolGLP-1基因整合于酵母染色体中，该重组菌株具有稳定高效表达rolGLP-1的特性和降低高血糖大鼠血糖水平的功能，可用于开发治疗糖尿病的酵母生物药物。

公开(公告)号：CN101824423A

公开(公告)日：2010-09-08

申请号：CN200910068036.2

申请日：2009-03-06

Applicant: 南开大学

Inventor： 李明刚 ,  赵磊 ,  王翠艳 ,  丁东风 ,  王瑞菊 ,  陈苗

IPC: C12N15/62 ,  C12N15/82 ,  C12N1/21 ,  A61K36/42 ,  A61P3/10 ,  C12R1/01

Abstract: 一种融合基因GAD-GLP-1和糖尿病食疗型黄瓜的培育方法。本发明提供的融合基因GAD-GLP-1如序列表所示，包含一段谷氨酸脱羧酶基因GAD和一段胰高血糖素样肽-1基因GLP-1，两个基因之间通过EcoRV位点进行连接，在EcoRV位点的两侧分别添加了两个赖氨酸，这四个氨基酸同时起到连接肽的作用。本发明将克隆载体pMD-GAD-GLP-1中的融合基因用BamHI和SalI酶切回收后连入Marker-free植物表达载体pX6中，构建得到无选择性标记的植物表达载体pX6-GAD-GLP-1，并转化到农杆菌LBA4404中构建成工程菌株。本发明通过农杆菌介导法，将GAD-GLP-1融合基因成功地转化到黄瓜自交系2M1，并获得了稳定表达GAD-GLP-1融合蛋白的转基因植株。糖尿病模型大鼠灌胃本发明提供的转基因黄瓜后，可以降低其血糖水平并改善其糖尿病症状。