一种包载蛋白的外泌体的制备方法与应用

    公开(公告)号:CN109321596A

    公开(公告)日:2019-02-12

    申请号:CN201811031133.X

    申请日:2018-09-05

    Applicant: 暨南大学

    Abstract: 本发明提供了一种包载蛋白的外泌体的制备方法与应用。所述的外泌体制备方法采用重组表达外源目的蛋白的方法,包括蛋白的瞬时表达和稳定表达,通过工程化大规模培养细胞的手段,获得大量包含外源目的蛋白的外泌体。本发明的培养过程不需要添加血清,免除了外泌体提取过程中血清囊泡的污染;通过规模培养细胞来获取大量装载具有生物活性抗体的外泌体,为外泌体的产业化提供了可能性,具有良好的产业化前景。同时,通过本发明的制备方法所得到的外泌体包载了活性蛋白,可以更易于透过组织和细胞膜,以及血脑屏障,到达病灶部位用于肿瘤等疾病的治疗;也可以用于护肤品,更易于透过皮肤,应用广泛。

    一种包载蛋白的外泌体的制备方法与应用

    公开(公告)号:CN109321596B

    公开(公告)日:2021-12-17

    申请号:CN201811031133.X

    申请日:2018-09-05

    Applicant: 暨南大学

    Abstract: 本发明提供了一种包载蛋白的外泌体的制备方法与应用。所述的外泌体制备方法采用重组表达外源目的蛋白的方法,包括蛋白的瞬时表达和稳定表达,通过工程化大规模培养细胞的手段,获得大量包含外源目的蛋白的外泌体。本发明的培养过程不需要添加血清,免除了外泌体提取过程中血清囊泡的污染;通过规模培养细胞来获取大量装载具有生物活性抗体的外泌体,为外泌体的产业化提供了可能性,具有良好的产业化前景。同时,通过本发明的制备方法所得到的外泌体包载了活性蛋白,可以更易于透过组织和细胞膜,以及血脑屏障,到达病灶部位用于肿瘤等疾病的治疗;也可以用于护肤品,更易于透过皮肤,应用广泛。

    一种装载shRNA的外泌体及其构建方法与应用

    公开(公告)号:CN111424017A

    公开(公告)日:2020-07-17

    申请号:CN202010228864.4

    申请日:2020-03-27

    Applicant: 暨南大学

    Abstract: 本发明公开了一种装载shRNA的外泌体及其构建方法与应用。本发明通过将可以有效沉默靶基因的shRNA序列克隆入表达载体,得到重组表达载体1;shRNA序列包括依次连接的靶序列、茎环结构序列和靶序列的互补序列;然后将能与所述的茎环结构特异性结合的蛋白A的基因与外泌体膜蛋白的基因连接,得到融合基因序列,再将所得的融合基因序列克隆入表达载体,得到重组表达载体2;最后将重组表达载体1、2同时转染细胞,培养转染后细胞,收集外泌体,即获得所述的装载shRNA的外泌体。该方法操作简单易行,工艺稳定,适用性好。所得外泌体中包载有大量shRNA,可以作为一种高效的药物传递系统。

    一种装载shRNA的外泌体及其构建方法与应用

    公开(公告)号:CN111424017B

    公开(公告)日:2022-08-09

    申请号:CN202010228864.4

    申请日:2020-03-27

    Applicant: 暨南大学

    Abstract: 本发明公开了一种装载shRNA的外泌体及其构建方法与应用。本发明通过将可以有效沉默靶基因的shRNA序列克隆入表达载体,得到重组表达载体1;shRNA序列包括依次连接的靶序列、茎环结构序列和靶序列的互补序列;然后将能与所述的茎环结构特异性结合的蛋白A的基因与外泌体膜蛋白的基因连接,得到融合基因序列,再将所得的融合基因序列克隆入表达载体,得到重组表达载体2;最后将重组表达载体1、2同时转染细胞,培养转染后细胞,收集外泌体,即获得所述的装载shRNA的外泌体。该方法操作简单易行,工艺稳定,适用性好。所得外泌体中包载有大量shRNA,可以作为一种高效的药物传递系统。

    一种运载蛋白、重组表达载体、外泌体及制备方法与应用

    公开(公告)号:CN109293745A

    公开(公告)日:2019-02-01

    申请号:CN201811023079.4

    申请日:2018-09-04

    Applicant: 暨南大学

    Abstract: 本发明提供了一种运载蛋白、重组表达载体、外泌体及制备方法与应用。所述的运载蛋白可以通过与外源目的蛋白融合,高效地携带外源目的蛋白进入外泌体中。本发明还提供了一种重组表达载体,可将待表达的外源蛋白肽段基因序列插入至所述的重组表达载体的多克隆位点上,实现高效、定向地使外源蛋白在细胞的外泌体中表达。同时,本发明还提供了一种携带外源蛋白的外泌体的制备方法,可有效地将外源目的基因带入外泌体中,操作简单易行,工艺稳定,适用性好。通过所述的制备方法制得的外泌体含有外源目的蛋白,并具有很好的细胞通透性,转染细胞的效率高,同时可发挥外源目的蛋白的活性与功效,具有广阔的应用前景。

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