公开(公告)号：CN111424017A

公开(公告)日：2020-07-17

申请号：CN202010228864.4

申请日：2020-03-27

Applicant: 暨南大学

Inventor： 谢秋玲 ,  麦俊新 ,  季煜华 ,  熊盛

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/85 ,  C12N15/113 ,  A61K48/00

Abstract: 本发明公开了一种装载shRNA的外泌体及其构建方法与应用。本发明通过将可以有效沉默靶基因的shRNA序列克隆入表达载体，得到重组表达载体1；shRNA序列包括依次连接的靶序列、茎环结构序列和靶序列的互补序列；然后将能与所述的茎环结构特异性结合的蛋白A的基因与外泌体膜蛋白的基因连接，得到融合基因序列，再将所得的融合基因序列克隆入表达载体，得到重组表达载体2；最后将重组表达载体1、2同时转染细胞，培养转染后细胞，收集外泌体，即获得所述的装载shRNA的外泌体。该方法操作简单易行，工艺稳定，适用性好。所得外泌体中包载有大量shRNA，可以作为一种高效的药物传递系统。

公开(公告)号：CN111424017B

公开(公告)日：2022-08-09

申请号：CN202010228864.4

申请日：2020-03-27

Applicant: 暨南大学

Inventor： 谢秋玲 ,  麦俊新 ,  季煜华 ,  熊盛

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/85 ,  C12N15/113 ,  A61K48/00

Abstract: 本发明公开了一种装载shRNA的外泌体及其构建方法与应用。本发明通过将可以有效沉默靶基因的shRNA序列克隆入表达载体，得到重组表达载体1；shRNA序列包括依次连接的靶序列、茎环结构序列和靶序列的互补序列；然后将能与所述的茎环结构特异性结合的蛋白A的基因与外泌体膜蛋白的基因连接，得到融合基因序列，再将所得的融合基因序列克隆入表达载体，得到重组表达载体2；最后将重组表达载体1、2同时转染细胞，培养转染后细胞，收集外泌体，即获得所述的装载shRNA的外泌体。该方法操作简单易行，工艺稳定，适用性好。所得外泌体中包载有大量shRNA，可以作为一种高效的药物传递系统。