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公开(公告)号：CN114634920B
公开(公告)日：2024-02-27
申请号：CN202210300484.6
申请日：2022-03-24
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种产人源透明质酸酶PH20的重组毕赤酵母及其构建方法，属于基因工程技术领域。本发明通过对hPH20的C端结构域优化，结合N端蛋白标签融合策略，构建了一个hPH20突变体AP2‑△491C；利用整合型质粒pPIC9K和强启动子PAOX1实现了hPH20突变体在P.pastoris GS115中的诱导表达，经3‑L发酵罐培养，发酵液中酶活达到258.1U/L，是目前微生物表达系统发酵制备hPH20的最高水平。该突变体能够水解机
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公开(公告)号：CN109355276B
公开(公告)日：2020-08-04
申请号：CN201811426687.X
申请日：2018-11-27
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种普鲁兰酶突变体及其应用，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明构建了一种普鲁兰酶突变体，得到的单突变体K419R(第419位赖氨酸突变为精氨酸)的酶活是野生型的1.3，67℃保温30min剩余酶活达67.3U/mg；迭代突变体K419R+Y102C+K383C(第419位赖氨酸突变为精氨酸，第102位酪氨酸和第383位赖氨酸分别突变为半胱氨酸)的酶活提高为野生型的2倍，在67℃保温30min剩余酶活达88.3U/mg，为保温前的43.1％，具有较好的热稳定性。本发明的普鲁兰酶突变体能够应用于淀粉糖化过程。
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公开(公告)号：CN110184259B
公开(公告)日：2020-12-29
申请号：CN201910612907.6
申请日：2019-07-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种厌氧芽孢杆菌来源普鲁兰酶突变体及其应用，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明构建的普鲁兰酶突变体K419R，在热稳定性与野生型普鲁兰酶相差不大的情况下，其比酶活是野生型普鲁兰酶的1.30倍；普鲁兰酶突变体K419R/T245C/A326C，在比酶活与野生型普鲁兰酶相同的情况下，其热稳定性较野生型大幅提升；而突变体K419R/T245C/A326C/W651C/V707C的比酶活是野生型的1.47倍，且具有良好的热稳定性。因此本发明的普鲁兰酶突变体能够满足淀粉脱支过程高温条件的要求，同时提高淀粉脱支和水解效率，对于普鲁兰酶的工业化应用至关重要。
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公开(公告)号：CN109880783B
公开(公告)日：2020-11-06
申请号：CN201910318050.7
申请日：2019-04-19
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/56 , C12N9/44 , C12N15/70 , C12P19/14 , C12P19/00 , C12P19/04 , C12P7/48 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种嗜热重组II型普鲁兰酶及其应用，属于基因工程技术领域。本发明通过在大肠杆菌中异源表达II型普鲁兰酶，获得一种嗜热重组II型普鲁兰酶，其最适pH为6.6，在pH 5.8‑8.0条件下有较好的pH耐受性，最适温度为95℃，在95℃保温10h，剩余酶活大于50％，能够在强还原条件下展现出较高的比酶活，如在培养环境中加入DTT，能使Sumo‑PulPy比酶活提升237.2％。本发明还提供了II型普鲁兰酶Sumo‑PulPy的组合截断突变体△28N+△791C，该酶突变体的比酶活为32.18±0.92U/mg，是野生酶的5.99倍，具有重要的工业应用价值和潜力。
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公开(公告)号：CN110184259A
公开(公告)日：2019-08-30
申请号：CN201910612907.6
申请日：2019-07-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种厌氧芽孢杆菌来源普鲁兰酶突变体及其应用，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明构建的普鲁兰酶突变体K419R，在热稳定性与野生型普鲁兰酶相差不大的情况下，其比酶活是野生型普鲁兰酶的1.30倍；普鲁兰酶突变体K419R/T245C/A326C，在比酶活与野生型普鲁兰酶相同的情况下，其热稳定性较野生型大幅提升；而突变体K419R/T245C/A326C/W651C/V707C的比酶活是野生型的1.47倍，且具有良好的热稳定性。因此本发明的普鲁兰酶突变体能够满足淀粉脱支过程高温条件的要求，同时提高淀粉脱支和水解效率，对于普鲁兰酶的工业化应用至关重要。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN106479948B
公开(公告)日：2019-06-21
申请号：CN201611166229.8
申请日：2016-12-16
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/75 , C12C11/00 , C12N9/44 , C12P7/06 , C12P19/16 , C12P19/00 , C12P19/04 , C12R1/125
CPC classification number: Y02E50/17
Abstract: 本发明公开了一种提高枯草芽孢杆菌普鲁兰酶分泌的方法，属于发酵工程领域。本发明通过构建重组表达普鲁兰酶的枯草芽孢杆菌，并在以此重组菌发酵生产普鲁兰酶的过程中，添加终浓度为0.4％的甜菜碱或0.2％的吐温‑80或0.4％的司盘80，普鲁兰酶的分泌效率可以达到76.13％、68.72％和72.84％，胞外pulA酶活分别达到22.95IU/ml、19.13IU/ml、20.11IU/ml。
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公开(公告)号：CN106479948A
公开(公告)日：2017-03-08
申请号：CN201611166229.8
申请日：2016-12-16
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/75 , C12C11/00 , C12N9/44 , C12P7/06 , C12P19/16 , C12P19/00 , C12P19/04 , C12R1/125
CPC classification number: Y02E50/17 , C12N9/2457 , C12C11/00 , C12C2200/05 , C12P7/06 , C12P19/00 , C12P19/04 , C12P19/16 , C12Y302/01041
Abstract: 本发明公开了一种提高枯草芽孢杆菌普鲁兰酶分泌的方法，属于发酵工程领域。本发明通过构建重组表达普鲁兰酶的枯草芽孢杆菌，并在以此重组菌发酵生产普鲁兰酶的过程中，添加终浓度为0.4％的甜菜碱或0.2％的吐温-80或0.4％的司盘80，普鲁兰酶的分泌效率可以达到76.13％、68.72％和72.84％，胞外pulA酶活分别达到22.95IU/ml、19.13IU/ml、20.11IU/ml。
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公开(公告)号：CN116064617B
公开(公告)日：2025-05-13
申请号：CN202211459643.3
申请日：2022-11-16
Applicant: 美药星(南京)制药有限公司 , 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种提高欧洲牡蛎溶菌酶产量的方法，属于生物工程领域。本发明从脊椎动物、软体动物、禽类和昆虫共12种不同来源溶菌酶基因序列中筛选获得了酶活相对较高的欧洲牡蛎来源溶菌酶，并实现酶在毕赤酵母中的活性表达。本发明还通过在OElyz的N端融合不同氨基酸短肽和蛋白标签。当融合Sumo标签时，摇瓶水平上重组OElyz的胞外酶活达到382.6U/mL，此产量水平可以满足溶菌酶在医药、生工、食品领域的应用需求。
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公开(公告)号：CN109880783A
公开(公告)日：2019-06-14
申请号：CN201910318050.7
申请日：2019-04-19
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/56 , C12N9/44 , C12N15/70 , C12P19/14 , C12P19/00 , C12P19/04 , C12P7/48 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种嗜热重组II型普鲁兰酶及其应用，属于基因工程技术领域。本发明通过在大肠杆菌中异源表达II型普鲁兰酶，获得一种嗜热重组II型普鲁兰酶，其最适pH为6.6，在pH 5.8-8.0条件下有较好的pH耐受性，最适温度为95℃，在95℃保温10h，剩余酶活大于50％，能够在强还原条件下展现出较高的比酶活，如在培养环境中加入DTT，能使Sumo-PulPy比酶活提升237.2％。本发明还提供了II型普鲁兰酶Sumo-PulPy的组合截断突变体△28N+△791C，该酶突变体的比酶活为32.18±0.92U/mg，是野生酶的5.99倍，具有重要的工业应用价值和潜力。
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公开(公告)号：CN109355276A
公开(公告)日：2019-02-19
申请号：CN201811426687.X
申请日：2018-11-27
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/2457 , C12N15/70 , C12P19/04 , C12P19/14 , C12Y302/01041
Abstract: 本发明公开了一种普鲁兰酶突变体及其应用，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明构建了一种普鲁兰酶突变体，得到的单突变体K419R(第419位赖氨酸突变为精氨酸)的酶活是野生型的1.3，67℃保温30min剩余酶活达67.3U/mg；迭代突变体K419R+Y102C+K383C(第419位赖氨酸突变为精氨酸，第102位酪氨酸和第383位赖氨酸分别突变为半胱氨酸)的酶活提高为野生型的2倍，在67℃保温30min剩余酶活达88.3U/mg，为保温前的43.1％，具有较好的热稳定性。本发明的普鲁兰酶突变体能够应用于淀粉糖化过程。
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