公开(公告)号：CN116064617B

公开(公告)日：2025-05-13

申请号：CN202211459643.3

申请日：2022-11-16

Applicant: 美药星(南京)制药有限公司 ,  江南大学

Inventor： 康振 ,  庞博 ,  邱银华 ,  王新敬 ,  王阳 ,  堵国成

IPC: C12N15/56 ,  C12N9/36 ,  C07K19/00 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12N1/06 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明公开了一种提高欧洲牡蛎溶菌酶产量的方法，属于生物工程领域。本发明从脊椎动物、软体动物、禽类和昆虫共12种不同来源溶菌酶基因序列中筛选获得了酶活相对较高的欧洲牡蛎来源溶菌酶，并实现酶在毕赤酵母中的活性表达。本发明还通过在OElyz的N端融合不同氨基酸短肽和蛋白标签。当融合Sumo标签时，摇瓶水平上重组OElyz的胞外酶活达到382.6U/mL，此产量水平可以满足溶菌酶在医药、生工、食品领域的应用需求。

公开(公告)号：CN117210444A

公开(公告)日：2023-12-12

申请号：CN202311177846.8

申请日：2023-09-13

Applicant: 江南大学

Inventor： 王阳 ,  康振 ,  李佳 ,  陈坚 ,  堵国成 ,  李江华 ,  王新敬

IPC: C12N9/76 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一种对酶进行再设计促进其在原核生物中可溶表达及活性提高的方法，属于计算化学，生物信息学，基因工程以及蛋白质工程技术领域。该方法包括以下步骤：将活性位点及其 范围内的氨基酸残基、底物结合位点及其 范围内的氨基酸残基设置为不允许变动位点，将半胱氨酸残基所在位点设置为氨基酸变动位点，不允许出现半胱氨酸且保持该位点氨基酸α碳原子不变，蛋白序列上其余位点设置为虚拟饱和突变位点，再经筛选得到再设计的酶。本发明通过上述方法设计得到的胰蛋白酶突变体可以在原核微生物中实现高效可溶表达，酰胺酶比酶活达到77.48U/mg，通过多位点突变实现了酶活的进一步提高，达到了137.05U/mg。

公开(公告)号：CN116064617A

公开(公告)日：2023-05-05

申请号：CN202211459643.3

申请日：2022-11-16

Applicant: 美药星(南京)制药有限公司 ,  江南大学

Inventor： 康振 ,  庞博 ,  邱银华 ,  王新敬 ,  王阳 ,  堵国成

IPC: C12N15/56 ,  C12N9/36 ,  C07K19/00 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12N1/06 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明公开了一种提高欧洲牡蛎溶菌酶产量的方法，属于生物工程领域。本发明从脊椎动物、软体动物、禽类和昆虫共12种不同来源溶菌酶基因序列中筛选获得了酶活相对较高的欧洲牡蛎来源溶菌酶，并实现酶在毕赤酵母中的活性表达。本发明还通过在OElyz的N端融合不同氨基酸短肽和蛋白标签。当融合Sumo标签时，摇瓶水平上重组OElyz的胞外酶活达到382.6U/mL，此产量水平可以满足溶菌酶在医药、生工、食品领域的应用需求。