公开(公告)号：CN107385078B

公开(公告)日：2021-01-22

申请号：CN201710760330.4

申请日：2017-08-30

Applicant: 浙江大学

Inventor： 汪以真 ,  王新霞 ,  江芹 ,  吴睿帆 ,  姚永曦 ,  蔡旻 ,  刘卿

IPC: C12Q1/6869 ,  C12Q1/6851 ,  C12N15/85 ,  G01N33/68

Abstract: 猪脂肪沉积相关PNPLA2 mRNA m6A甲基化单位点的鉴定方法，根据m6A‑seq测序得到的是100nt左右的片段中存在m6A甲基化位点，其特征在于：根据甲基化高度保守的RRACH(R＝G,A；H＝A,C,T)序列进行PNPLA2基因的m6A单位点位置的确认。本发明通过生物信息学分析，根据m6A的保守序列，鉴定了m6A的具体位点；本发明提供了在猪中鉴定PNPLA2 mRNA m6A甲基化水平的引物序列和具体方法；本发明通过基因单位点突变改变PNPLA2 m6A水平证明了PNPLA2 m6A位点对脂肪沉积的影响的功能。

公开(公告)号：CN106399488A

公开(公告)日：2017-02-15

申请号：CN201610799660.X

申请日：2016-08-31

Applicant: 浙江大学

Inventor： 汪以真 ,  王新霞 ,  蔡旻 ,  江芹

IPC: C12Q1/68

CPC classification number: C12Q1/6858 ,  C12Q2531/113 ,  C12Q2563/107

Abstract: 本发明公开了一种基因mRNA的m6A单碱基位点鉴定方法，包括以下步骤：1)、将样品进行高通量测序，根据测序结果挑选出靶基因，并确定其m6A峰大致位置；2)、利用在线工具SRAMP得到该基因的m6A峰区域序列中所有可能存在m6A位点信息；3)、构建该基因的超表达载体和突变载体；4)、将步骤3)得到的两种载体分别转染细胞，收集细胞提取RNA；5)、将步骤4)得到的富集的含有m6A的RNA反转录为cDNA，设计各个突变位点区域的荧光定量引物；将超表达载体组和突变载体组的荧光定量结果比较，若某位点突变载体组结果小于超表达载体组且P

公开(公告)号：CN107419026B

公开(公告)日：2020-12-22

申请号：CN201710760315.X

申请日：2017-08-30

Applicant: 浙江大学

Inventor： 王新霞 ,  汪以真 ,  江芹 ,  吴睿帆 ,  姚永曦 ,  蔡旻 ,  刘卿

IPC: C12Q1/6858 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/85 ,  G01N33/68

Abstract: 猪脂肪沉积相关UCP2 mRNA m6A甲基化单位点的鉴定方法，根据m6A‑seq测序得到的是100nt左右的片段中存在m6A甲基化位点，其特征在于：根据甲基化高度保守的RRACH(R＝G,A；H＝A,C,T)序列进行UCP2基因的单位点位置的确认。通过生物信息学分析，根据m6A的保守序列，鉴定了m6A的具体位点；提供了在猪中鉴定UCP2 mRNA m6A甲基化水平的引物序列和具体方法；通过基因单位点突变改变UCP2 m6A水平证明了UCP2 m6A位点对脂肪沉积的影响的功能。

公开(公告)号：CN105018617A

公开(公告)日：2015-11-04

申请号：CN201510429231.9

申请日：2015-07-20

Applicant: 浙江大学

Inventor： 汪以真 ,  王新霞 ,  江芹 ,  蔡旻

IPC: C12Q1/68 ,  C12N15/11

CPC classification number: C12Q1/6888 ,  C12Q1/6851 ,  C12Q2600/154 ,  C12Q2545/113 ,  C12Q2565/113 ,  C12Q2563/107

Abstract: 本发明公开了一种单个基因mRNA甲基化水平检测方法，包括以下步骤：1)、设计靶基因甲基化区域的荧光定量引物；2)、提取总RNA，用化学断裂法将总RNA片段化为RNA片段；3)、将步骤2)得到的片段化的RNA通过特异性识别m6A的抗体将带有m6A位点的所有mRNA片段沉淀下来，并用琼脂糖磁珠进行收集富集；4)、将步骤3)中抗体富集得到的mRNA片段反转录，用步骤1)的荧光定量PCR引物进行实时荧光定量PCR，即可得到含甲基化的靶基因相对表达量，相对表达量的高低就代表了单个基因mRNA甲基化水平高低。

公开(公告)号：CN107419026A

公开(公告)日：2017-12-01

申请号：CN201710760315.X

申请日：2017-08-30

Applicant: 浙江大学

Inventor： 王新霞 ,  汪以真 ,  江芹 ,  吴睿帆 ,  姚永曦 ,  蔡旻 ,  刘卿

IPC: C12Q1/68 ,  C12N15/85 ,  G01N33/68

Abstract: 猪脂肪沉积相关UCP2 mRNA m6A甲基化单位点的鉴定方法，根据m6A-seq测序得到的是100nt左右的片段中存在m6A甲基化位点，其特征在于：根据甲基化高度保守的RRACH(R＝G,A；H＝A,C,T)序列进行UCP2基因的单位点位置的确认。通过生物信息学分析，根据m6A的保守序列，鉴定了m6A的具体位点；提供了在猪中鉴定UCP2 mRNA m6A甲基化水平的引物序列和具体方法；通过基因单位点突变改变UCP2 m6A水平证明了UCP2 m6A位点对脂肪沉积的影响的功能。

公开(公告)号：CN107385078A

公开(公告)日：2017-11-24

申请号：CN201710760330.4

申请日：2017-08-30

Applicant: 浙江大学

Inventor： 汪以真 ,  王新霞 ,  江芹 ,  吴睿帆 ,  姚永曦 ,  蔡旻 ,  刘卿

IPC: C12Q1/68 ,  C12N15/85 ,  G01N33/68

CPC classification number: C12Q1/6869 ,  C12N15/85 ,  C12Q1/6851 ,  G01N33/68 ,  C12Q2535/122 ,  C12Q2531/113 ,  C12Q2561/113 ,  C12Q2563/107

Abstract: 猪脂肪沉积相关PNPLA2 mRNA m6A甲基化单位点的鉴定方法，根据m6A-seq测序得到的是100nt左右的片段中存在m6A甲基化位点，其特征在于：根据甲基化高度保守的RRACH(R＝G,A；H＝A,C,T)序列进行PNPLA2基因的m6A单位点位置的确认。本发明通过生物信息学分析，根据m6A的保守序列，鉴定了m6A的具体位点；本发明提供了在猪中鉴定PNPLA2 mRNA m6A甲基化水平的引物序列和具体方法；本发明通过基因单位点突变改变PNPLA2 m6A水平证明了PNPLA2 m6A位点对脂肪沉积的影响的功能。