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公开(公告)号：CN118064536A
公开(公告)日：2024-05-24
申请号：CN202410237565.5
申请日：2024-03-01
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种靶向FTO基因调控mRNA m6A水平进行营养素高通量筛选的技术体系。基于CRISPR knock‑in技术，构建靶向FTO基因的sgRNA‑Cas9载体和两侧包含FTO基因同源臂的mNeonGreen DNA模版质粒，利用核电转法将其转入脂肪细胞中得到FTO报告细胞，对1000种以上的营养素(包括但不限于植物提取物、脂肪酸、氨基酸等多种营养素库)进行高通量细胞处理，通过共聚焦高内涵成像分析系统观察mNeonGreen荧光表达，筛选得到能够调控mRNA m6A水平的营养素。本发明可用于高通量筛选调控mRNA m6A水平的营养素，对于简便、快速、高效地鉴定具有mRNA m6A水平调控活性的营养素具有重要意义。
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公开(公告)号：CN113455588A
公开(公告)日：2021-10-01
申请号：CN202110662660.6
申请日：2021-06-15
Applicant: 浙江大学
IPC: A23K20/158 , A23K50/50
Abstract: 本发明公开了DHA作为饲料添加剂在调控肌纤维类型中的新用途。DHA作为饲料添加剂的新用途，在高脂饮食中添加DHA增加小鼠骨骼肌组织中mRNA m6A去甲基化酶FTO蛋白表达，从而降低小鼠骨骼肌中总mRNA m6A修饰水平。在高脂饮食情况下增加小鼠骨骼肌中线粒体数量，促进小鼠骨骼肌氧化磷酸化基因表达，减少糖酵解基因表达，促进骨骼肌肌纤维类型向慢肌纤维转换，增加小鼠的运动耐力。DHA在高脂饮食中的添加量为500 mg/kg体重/天。DHA促进C2C12细胞系中m6A去甲基化酶FTO表达并降低m6A水平。DHA不含对动物或人体有害的物质，添加量较少，可以直接加入动物饲料、食品或药品中，具有安全、有效、不会引起毒副作用等优点，在作为饲料添加剂改善动物肉品质的应用具有良好的推广应用前景。
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公开(公告)号：CN106047997A
公开(公告)日：2016-10-26
申请号：CN201610362981.3
申请日：2016-05-27
Applicant: 浙江大学
CPC classification number: C12Q1/6869 , C12Q1/6855 , C40B50/06 , C12Q2535/122 , C12Q2525/191
Abstract: 本发明公开了一种mRNA甲基化高通量检测方法，包括以下步骤：mRNA样品提取；将提取的RNA样品进行片段化；将得到的RNA片段利用特异性识别mRNA上m6A甲基化(m6A)的抗体进行免疫富集；将步富集后含有m6A的mRNA片段洗脱后进行沉淀纯化；将所得纯化后的RNA反转录成cDNA，并进行DNA末端修复、接头连接和PCR扩增，完成mRNA甲基化文库的构建；将完成的文库利用分析测序文库的高通量测序平台进行测序。
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公开(公告)号：CN119662567A
公开(公告)日：2025-03-21
申请号：CN202411696557.3
申请日：2024-11-25
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了高效富集猪粪便样本噬菌体粒子的方法。将猪粪便样本充分溶解于SM缓冲液，即100 mM NaCl,8mM MgSO4,50 mM Tris，pH 7.5中，并初步离心，收集上清液；用0.22μm的微孔滤膜对上清液进行过滤；收集过滤液并加入终浓度质量百分比20%的PEG 8000和0.6%NaCl；于4℃条件下静置1h以上；接着在4℃条件下离心以沉淀PEG和病毒颗粒；弃上清，并用SM缓冲液重悬沉淀样物质；重复上述离心、PEG、NaCl处理和SM缓冲液重悬步骤；加入终浓度为20%的三氯甲烷，并在20℃‑25℃下孵育10 min；随后离心分离水相，将水相转移至1.5mL的离心管中，所得水相即为高浓度的病毒粒子浓缩液。该方法不需超高速离心机，试剂配制方法简单，大大减小了实验方法复现的难度。
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公开(公告)号：CN114292804A
公开(公告)日：2022-04-08
申请号：CN202111511138.4
申请日：2021-12-11
Applicant: 浙江大学
IPC: C12N5/071 , C12N5/0775
Abstract: 本发明提供了一种血管化脂肪类器官培养的方法，所述方法包括小鼠内脏脂肪干细胞分离扩增和血管化脂肪类器官培养两个部分。本发明使用促血管生长因子和血管化脂肪类器官培养基在三维培养条件下诱导小鼠内脏脂肪干细胞自发形成血管化脂肪类器官，改进了传统脂肪三维培养方法。本方法可操作性强，实验可重复性高，成本较低，为脂肪生物学和肥胖研究提供操作简便，易于定量分析，并能反映动物体内脂肪发育模式的体外新模型。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113355281A
公开(公告)日：2021-09-07
申请号：CN202110681912.X
申请日：2021-06-19
Applicant: 浙江大学
IPC: C12N5/0775
Abstract: 本发明公开了一种高效分离小鼠肌内纤维‑成脂祖细胞的方法，步骤包括：（一）胶原蛋白涂层培养皿；（二）小鼠骨骼肌的分离和消化；（三）差异贴壁分离FAP。通过细胞流式分析及油红O染色确定分离的细胞纯度高，分化潜能高，增殖速度快，存活率高；采用胶原蛋白涂层培养皿利于细胞贴附，大大缩短分离时间，提高细胞得率；所使用的C57BL/6小鼠来源广泛，较易得到，大大减小了实验方法复现的难度。且相比于传统的流式分选法，不需要流式分选仪，更加经济实惠，方便快捷；为研究骨骼肌的发育和再生中纤维/成脂祖细胞功能提供良好的细胞基础。
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公开(公告)号：CN113308438A
公开(公告)日：2021-08-27
申请号：CN202110653510.9
申请日：2021-06-11
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种FTO基因修饰的猪脂肪干细胞及其构建方法与应用。构建方法步骤包括：1）猪脂肪干细胞（pADSCs）分离；2）脂质体法瞬时超表达FTO基因，构建FTO基因修饰的猪脂肪干细胞。pADSCs超表达FTO增加了细胞周期蛋白CDK2和CDK4蛋白表达；促进细胞周期G1期向S期过渡；增加成脂分化关键基因PPARγ、FABP4和C/EBPα的mRNA表达水平。接种在胶原海绵支架中可构建组织工程皮肤。
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公开(公告)号：CN105018617A
公开(公告)日：2015-11-04
申请号：CN201510429231.9
申请日：2015-07-20
Applicant: 浙江大学
CPC classification number: C12Q1/6888 , C12Q1/6851 , C12Q2600/154 , C12Q2545/113 , C12Q2565/113 , C12Q2563/107
Abstract: 本发明公开了一种单个基因mRNA甲基化水平检测方法，包括以下步骤：1)、设计靶基因甲基化区域的荧光定量引物；2)、提取总RNA，用化学断裂法将总RNA片段化为RNA片段；3)、将步骤2)得到的片段化的RNA通过特异性识别m6A的抗体将带有m6A位点的所有mRNA片段沉淀下来，并用琼脂糖磁珠进行收集富集；4)、将步骤3)中抗体富集得到的mRNA片段反转录，用步骤1)的荧光定量PCR引物进行实时荧光定量PCR，即可得到含甲基化的靶基因相对表达量，相对表达量的高低就代表了单个基因mRNA甲基化水平高低。
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公开(公告)号：CN102296080A
公开(公告)日：2011-12-28
申请号：CN201110274221.4
申请日：2011-09-16
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种大黄鱼甘油三酯脂酶ATGL基因，为SEQ ID NO：1所示或SEQ IDNO：2所示的核苷酸序列。本发明还同时公开了编码上述大黄鱼甘油三酯脂酶ATGL基因的蛋白质，为SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列。该大黄鱼甘油三酯脂酶ATGL基因的用途是：能用于大黄鱼的脂肪分解。该基因对于进一步深入了解大黄鱼的脂肪代谢过程，并通过营养手段调控大黄鱼脂肪代谢，从而减少大黄鱼脂肪沉积起到重要作用。
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公开(公告)号：CN101491300B
公开(公告)日：2011-12-28
申请号：CN200910096515.5
申请日：2009-03-05
Applicant: 浙江大学
CPC classification number: Y02A40/818
Abstract: 本发明公开了2种防治大黄鱼脂肪肝的饲料添加剂，其配方及重量含量为：甜菜碱35％～45％、L-肉碱5％～10％、VE3％～5％、柴胡10％～15％、丹参8％～12％和茵陈25％～30％；或者为：甜菜碱25％～35％、L-肉碱5％～10％、VE10％～15％、柴胡10％～15％、丹参8％～12％和茵陈25％～30％。该种饲料添加剂能够促进大黄鱼体内脂肪代谢，减少大黄鱼肝脏中脂肪的蓄积；当大黄鱼有轻微脂肪肝倾向时，还可以在一定程度上恢复大黄鱼肝脏健康。
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