公开(公告)号：CN101407823B

公开(公告)日：2010-08-11

申请号：CN200810209569.3

申请日：2008-11-28

Applicant: 东北林业大学

Inventor： 刘关君 ,  刘桂丰 ,  杨传平 ,  刘明坤 ,  阎秀峰 ,  许志茹 ,  魏志刚 ,  王柏臣

IPC: C12N15/81

Abstract: 一种构建酵母双价通用表达载体的方法，它涉及一种构建双价表达载体的方法。本发明解决了现有构建载体的方法不能构建出可以表达任意目的基因的通用载体的问题。本发明构建酵母双价通用表达载体的方法按照以下步骤进行：一、根据酵母表达载体pYES2序列分别设计引物，进行PCR扩增获得目的片段PGAL1和目的片段CYC1；二、得到质粒pMD18-PGAL1；三、获得质粒pMD18-PC；四、双酶切后回收目的片段和质粒pYES2并连接；获得酵母双价通用表达载体pYES2-PC。用本发明的方法构建出的通用双价载体能够准确表达连接的基因，只需要将目的基因片段直接连接在本发明构建的通用双价表达载体上就可以准确表达。

公开(公告)号：CN101294165A

公开(公告)日：2008-10-29

申请号：CN200810064790.4

申请日：2008-06-23

Applicant: 东北林业大学

Inventor： 许志茹 ,  王柏臣 ,  刘关君 ,  刘昌财 ,  刘明坤 ,  魏志刚 ,  刘桂丰 ,  杨传平

IPC: C12N15/82 ,  C12N15/11

Abstract: 一种构建pROK II植物双价表达载体的方法及其使用的通用引物，它涉及一种植物双价表达载体的方法及其使用的通用引物。它解决了目前构建pROKII双价载体的方法需要通过中间载体更换酶切位点才能实现，步骤繁琐、构建周期长的问题。方法：一、构建单价载体；二、制备两边带有EcoR I粘末端的35S－A－Tnos片段；三、制备两边带有EcoR I粘末端的开环B/pROK II；四、将步骤二和三得到的基因片段进行酶连接。通用引物为P35S－S1和Tnos－A1。本发明方法与目前构建pROKII双价载体的方法相比较，减少了连接和转化的次数具有步骤少、操作简单、构建周期短和不必更换酶切位点的优点，能够明显地提高工作效率。