公开(公告)号：CN101294165B

公开(公告)日：2011-04-27

申请号：CN200810064790.4

申请日：2008-06-23

Applicant: 东北林业大学

Inventor： 许志茹 ,  王柏臣 ,  刘关君 ,  刘昌财 ,  刘明坤 ,  魏志刚 ,  刘桂丰 ,  杨传平

IPC: C12N15/82 ,  C12N15/11

Abstract: 一种构建pROK？II植物双价表达载体的方法及其使用的通用引物，它涉及一种植物双价表达载体的方法及其使用的通用引物。它解决了目前构建pROKII双价载体的方法需要通过中间载体更换酶切位点才能实现，步骤繁琐、构建周期长的问题。方法：一、构建单价载体；二、制备两边带有EcoR？I粘末端的35S-A-Tnos片段；三、制备两边带有EcoR？I粘末端的开环B/pROK？II；四、将步骤二和三得到的基因片段进行酶连接。通用引物为P35S-S1和Tnos-A1。本发明方法与目前构建pROKII双价载体的方法相比较，减少了连接和转化的次数具有步骤少、操作简单、构建周期短和不必更换酶切位点的优点，能够明显地提高工作效率。

公开(公告)号：CN101294165A

公开(公告)日：2008-10-29

申请号：CN200810064790.4

申请日：2008-06-23

Applicant: 东北林业大学

Inventor： 许志茹 ,  王柏臣 ,  刘关君 ,  刘昌财 ,  刘明坤 ,  魏志刚 ,  刘桂丰 ,  杨传平

IPC: C12N15/82 ,  C12N15/11

Abstract: 一种构建pROK II植物双价表达载体的方法及其使用的通用引物，它涉及一种植物双价表达载体的方法及其使用的通用引物。它解决了目前构建pROKII双价载体的方法需要通过中间载体更换酶切位点才能实现，步骤繁琐、构建周期长的问题。方法：一、构建单价载体；二、制备两边带有EcoR I粘末端的35S－A－Tnos片段；三、制备两边带有EcoR I粘末端的开环B/pROK II；四、将步骤二和三得到的基因片段进行酶连接。通用引物为P35S－S1和Tnos－A1。本发明方法与目前构建pROKII双价载体的方法相比较，减少了连接和转化的次数具有步骤少、操作简单、构建周期短和不必更换酶切位点的优点，能够明显地提高工作效率。