一种高效鉴定水稻增强子的原生质体验证方法

    公开(公告)号:CN111254160A

    公开(公告)日:2020-06-09

    申请号:CN202010234221.0

    申请日:2020-03-30

    Applicant: 扬州大学

    Inventor: 张韬 李鑫琪 刘鹏

    Abstract: 本发明公开了一种高效鉴定水稻增强子的原生质体验证方法,包括如下步骤:(1)构建载体:正对照载体采用p1300LV载体,同时构建相应的负对照载体;(2)增强子的分离克隆及表达载体构建:选取增强子序列,以水稻基因组DNA为模板,PCR扩增得到目的片段,再与BsaI酶线性化的负对照载体连接,得到增强子表达载体;(3)制备水稻原生质体;(4)水稻原生质体的转化:将增强子表达载体与水稻原生质体在PEG介导下共培养,进行转化;(5)显微镜观察荧光信号。本发明方法首次提出了通过水稻瞬时转化验证增强子活性的方法,高效,快捷。

    一种水稻OsGIF1或DEP1基因上游的uORF元件及用途

    公开(公告)号:CN119432868A

    公开(公告)日:2025-02-14

    申请号:CN202411342522.X

    申请日:2024-09-25

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明提供了一种水稻OsGIF1或DEP1基因上游的uORF元件及用途,所述调控水稻OsGIF1或DEP1基因表达的uORF元件核苷酸序列如SEQ ID NO.1‑4任意一种所示,其中OsGIF1‑uORF1、OsGIF1‑uORF2可作为OsGIF1基因的表达调控元件,核苷酸序列如SEQ ID NO.1和2所示;DEP1‑uORF1、DEP1‑uORF2可作为DEP1基因的表达调控元件,核苷酸序列如SEQ ID NO.3和4所示。本发明uORF调控元件可分别用于调节水稻OsGIF1或DEP1基因的蛋白表达水平,改良了植株生长发育,将其应用于水稻品种的遗传改良,具有重要的育种价值。

    一种强活性的水稻启动子序列及验证方法

    公开(公告)号:CN114292845B

    公开(公告)日:2024-02-23

    申请号:CN202111628276.0

    申请日:2021-12-28

    Applicant: 扬州大学

    Inventor: 刘鹏 张韬

    Abstract: 本发明公开了一种强活性的水稻启动子序列及验证方法,基因序列如SEQ ID NO.1。方法包括:(1)OsUBQ启动子序列扩增,构建OsUBQ驱动GFP的表达载体;(2)Ubi1启动子序列扩增,构建由Ubi1驱动的GFP表达载体;(3)使用CaMV35S启动子为正对照;(4)水稻原生质体制备与转化;子CaMV35S、OsUBQ和Ubi1活性。本发明的水稻启动子序列,本质是DNA分子,1405bp,能够启动基因的表达并且活性更强。(5)在瞬时表达系统通过荧光强度评估三个启动

    一种有活性的落叶松增强子、获取及鉴定方法

    公开(公告)号:CN112553198B

    公开(公告)日:2022-06-14

    申请号:CN202011333005.8

    申请日:2020-11-24

    Applicant: 扬州大学

    Inventor: 张韬 刘鹏 刘冠卿

    Abstract: 本发明公开了一种有活性的落叶松增强子、获取及鉴定方法。增强子DNA序列如SEQ ID NO.1。用特异引物以日本落叶松的基因组DNA为模板,扩增得到560bp的扩增产物,即得。根据增强子可远距离促进转录的特征,mini35s启动子单独不能启动的报告基因GFP表达,当该载体中连入有功能的增强子后,其可以促进荧光蛋白转录,从而观察到荧光,以验证。本发明提供的落叶松增强子序列,本质是DNA分子,560bp,能够促进转录。

    一种快速鉴定水稻双向启动子的方法

    公开(公告)号:CN111394385A

    公开(公告)日:2020-07-10

    申请号:CN202010234073.2

    申请日:2020-03-30

    Applicant: 扬州大学

    Inventor: 刘鹏 李鑫琪 张韬

    Abstract: 本发明公开了一种快速鉴定水稻双向启动子的方法,该方法将双向启动子OsBDP1和OsBDP2两端分别连接两个不同的荧光蛋白GFP和RFP,在原生质体转化后观察两侧的荧光信号来检测其活性。该鉴定方法一方面利用瞬时转化缩短了实验时间,另一方面通过同时检测两侧荧光蛋白活性而减少了工作量,为快速鉴定水稻中的双向启动子提供了一个高效途径。

    一种水稻增强子及基于CRISPR/Cas9技术评估水稻增强子活性的方法

    公开(公告)号:CN114774420A

    公开(公告)日:2022-07-22

    申请号:CN202210454378.3

    申请日:2022-04-27

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明公开了一种水稻增强子及基于CRISPR/Cas9技术评估水稻增强子活性的方法,水稻增强子,序列如SEQ ID NO.1。获取增强子,长度为461 bp;LOC_Os07g34589基因的启动子中,分离得到62 bp mini启动子序列;构建负对照载体,使用LOC_Os07g34589基因的两个mini启动子序列反向连接,分别驱动Cas9蛋白和sgRNA表达;构建增强子检测载体,在上述负对照载体中,两个mini启动子中间插入igENH1增强子序列;水稻原生质体的制备与转化;转化后通过分析增强子活性。所述水稻增强子具有较好的增强转录效果。

    一种有活性的落叶松增强子、获取及鉴定方法

    公开(公告)号:CN112553198A

    公开(公告)日:2021-03-26

    申请号:CN202011333005.8

    申请日:2020-11-24

    Applicant: 扬州大学

    Inventor: 张韬 刘鹏 刘冠卿

    Abstract: 本发明公开了一种有活性的落叶松增强子、获取及鉴定方法。增强子DNA序列如SEQ ID NO.1。用特异引物以日本落叶松的基因组DNA为模板,扩增得到560bp的扩增产物,即得。根据增强子可远距离促进转录的特征,mini35s启动子单独不能启动的报告基因GFP表达,当该载体中连入有功能的增强子后,其可以促进荧光蛋白转录,从而观察到荧光,以验证。本发明提供的落叶松增强子序列,本质是DNA分子,560bp,能够促进转录。

    一种具有启动子功能的落叶松DNA分子、获取及鉴定方法

    公开(公告)号:CN112481260A

    公开(公告)日:2021-03-12

    申请号:CN202011332979.4

    申请日:2020-11-24

    Applicant: 扬州大学

    Inventor: 刘鹏 张韬 刘冠卿

    Abstract: 本发明公开了一种具有启动子功能的落叶松DNA分子、获取及鉴定方法。启动子DNA序列如SEQ ID NO.1。用特异引物以日本落叶松(Larix kaempferi)的基因组DNA为模板,扩增得到1179bp的扩增产物,即得。将该段DNA分子启动GFP荧光蛋白基因表达,在荧光显微镜下可观察到荧光,证实该序列有功能,反之,则不能。本发明提供的落叶松启动子序列,本质是DNA分子,1179bp,能够启动转录。

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