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公开(公告)号：CN105695581A
公开(公告)日：2016-06-22
申请号：CN201610136155.7
申请日：2016-03-10
Applicant: 东华大学 , 上海翼和应用生物技术有限公司
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明涉及一种基于二代测试平台的中通量基因表达分析方法，包括：按照多个基因的相对表达量将相应的PCR引物分为两组，并在组内调整引物浓度比例；构建标准品竞争性模板和待测样品竞争性模板，进行三轮多重竞争性PCR反应；混合第三轮反应产物作为二代测试平台文库上机测序，提取数据并分析，即可得到不同样本间多个基因相对表达量差异。本发明基于高速发展的二代测序平台，准确快速定量目标模板和内参照模板，并可以同时对多个样本进行5个目的基因表达差异分析，流程简单易行，价格低廉；当需要分析多样本间多基因表达差异时，不失为一种具有高准确度，通量适中，成本廉价的方法。
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公开(公告)号：CN104170792B
公开(公告)日：2016-06-08
申请号：CN201410397040.4
申请日：2014-08-13
Applicant: 东华大学
Abstract: 本发明涉及一种基于ZZ2小家鼠来源的1号染色体替换B6-Chr1ZZ2/Xiao小鼠模型的构建方法，包括：将ZZ2小鼠与小鼠C57BL/6J杂交，获得F1代，取F1代小鼠与C57BL/6J回交，获得F2代，通过基因分型筛选出整个1号染色体为杂合状态的小鼠；F2代小鼠与C57BL/6J回交，以相同的方式回交，筛选10代后，形成1号染色体为杂合状态，其余染色体均为纯合C57BL/6J基因型的小鼠群体；鉴定回交小鼠的基因DNA；1号染色体为ZZ2与B6杂合状态的回交小鼠经过10代回交后，育成携带ZZ2小鼠1号染色体的同源基因导入近交系，通过兄妹自交和基因鉴定筛选，即得。
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公开(公告)号：CN103937826B
公开(公告)日：2016-04-06
申请号：CN201410136599.1
申请日：2014-04-04
Applicant: 东华大学
IPC: C12N15/66
Abstract: 本发明涉及一种中枢神经系统中特异表达miR-505的载体的制备方法，包括：用PCR方法获得目的基因，将GFAP启动子从pAAV-GFAP-hchR2-mcherry-WPRE载体上用合适的限制性内切酶切下，与目的基因连接克隆到pUC19载体上，然后通过合适的酶切位点将GFAP-EGFP-mir-505片段从pUC载体上切下，克隆到PB载体上，获得载体。本发明可与表达转座酶的辅助载体共注射小鼠的受精卵的雄性原核，得到转基因小鼠，用以研究miR-505在神经系统特别是在神经胶质细胞中的包括调控性发育启动在内的生物学功能，并且EGFP蛋白能方便地显示外源基因在神经系统中的定位。
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公开(公告)号：CN104651401A
公开(公告)日：2015-05-27
申请号：CN201510098102.6
申请日：2015-03-05
Applicant: 东华大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/65 , C12N15/113
Abstract: 本发明涉及一种mir-505双等位基因敲除的方法，包括：构建两种针对mir-505基因的打靶载体，在哺乳动物细胞中通过CRISPR/Cas系统介导打靶载体对mir-505基因进行替换敲除，利用G418抗性筛选得到mir-505单等位基因敲除细胞，并在该细胞基础上再一次利用CRISPR/Cas系统和绿色荧光打靶载体作用对另一条mir-505进行敲除，通过荧光筛选得到mir-505双等位基因敲除的细胞。本发明为构建基因彻底敲除细胞模型提供帮助，具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN104212836A
公开(公告)日：2014-12-17
申请号：CN201410478757.1
申请日：2014-09-18
Applicant: 东华大学
IPC: C12N15/85
Abstract: 本发明涉及一种在哺乳动物细胞系中敲除mir-505的方法，通过体外合成sgRNA的核苷酸单链，再经过处理得到插入片段，随后将sgRNA利用同源重组或T4连接插入到41824载体中或42230载体中，转化至大肠杆菌的感受态细胞，然后对载体进行菌落PCR检测和测序确认，得到表达载体，通过将PCR产物变性，再退火的方式形成异源杂交双链，利用T7E1酶切试验确定利用CRISPR-Cas9系统对mir-505基因的剪切效率。本发明为如何选择sgRNA表达载体提供参考。
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公开(公告)号：CN103725759A
公开(公告)日：2014-04-16
申请号：CN201210382385.3
申请日：2012-10-10
Applicant: 上海西普尔-必凯实验动物有限公司 , 东华大学
IPC: C12Q1/68
CPC classification number: C12Q1/6888 , A01K67/027 , C12Q2600/156
Abstract: 本发明涉及1号染色体替换野生小家鼠C57BL/6.松江3-Chr1的建立。构建了一种新的染色体C57BL/6替代实验小鼠品系，该小鼠品系的遗传背景以C57BL/6小鼠为主，但其中1号染色体以松江3小鼠为主。本发明的染色体替换品系可用于研究在相同基因组背景下，由不同的1号染色体基因组带来的性状差异，是采用遗传学方法研究染色体基因组功能的有用工具。
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公开(公告)号：CN101241126A
公开(公告)日：2008-08-13
申请号：CN200810034675.2
申请日：2008-03-14
Applicant: 东华大学
Abstract: 本发明涉及一种生物条形码探针的制备方法，包括：将纳米金溶液与等体积的吐温20缓冲液混合，离心，浓缩后加入到巯基化探针中，水浴过夜，加高浓度的NaCl溶液，水浴，离心，洗涤，稀释，得生物条形码探针，再将生物条形码探针、磁珠探针和靶序列DNA混合、杂交，磁分离器分离磁珠，去除未杂交的生物条形码探针，洗涤，加洗脱液，处理完成后，用磁分离器去除磁珠，留上清液进行荧光检测。该制备方法制备简单，所制备的生物条形码探针更加稳定，检测时间短，检测特异性大大提高。
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公开(公告)号：CN114703212B
公开(公告)日：2024-03-29
申请号：CN202210194874.X
申请日：2022-03-01
Applicant: 东华大学
Abstract: 本发明公开了一种运用特定区段随机突变法改造漆酶的方法及漆酶菌株lac123。本发明通过分析，选定LAC1第二结构域和第三结构域靠近漆酶活性位点附近的重要功能区段作为靶标序列，在对该序列DNA进行化学合成时，采用简并引物法在特定的若干个碱基位点引入随机突变，并将合成好的随机片段通过同源重组的方法，对野生酶的相同片段进行替换，构建包含特异区段特定位点DNA序列的随机突变库，通过二代测序对库容量进行检测，并对随机突变库中的大肠杆菌克隆进行漆酶活性的批量筛选，初筛到了5株酶活有所提升的漆酶，经过摇瓶复筛得到一株酶活提升2.3倍的突变漆酶菌株LAC123，其表达蛋白序列如SEQ ID NO:3所示。
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公开(公告)号：CN117385101A
公开(公告)日：2024-01-12
申请号：CN202311421024.X
申请日：2023-10-30
Applicant: 东华大学
Abstract: 一种基于连接反应的RNA病毒的多重检测方法，利用连接酶对四种或更多的RNA病毒在同一试管中进行多重连接，该步骤能省略将RNA逆转录成cDNA的过程，在每对探针的5‘端加上通用引物序列，然后可以用通用引物将连接产物进行同时扩增，通过电泳检测扩增产物，以实现RNA病毒的多重检测。针对每个病毒RNA的特异序列设计一对DNA连接探针，利用SplintR连接酶连接与模板RNA互补配对的这一对DNA探针。优化连接探针浓度、退火杂交程序、连接反应温度、连接酶浓度，运用荧光定量PCR和毛细管电泳检测连接产物，建立多重RNA病毒检测方案。
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