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公开(公告)号：CN116162692A
公开(公告)日：2023-05-26
申请号：CN202310055436.X
申请日：2023-01-18
Applicant: 东华大学 , 上海翼和应用生物技术有限公司
IPC: C12Q1/6876 , C12Q1/6851 , C12N15/11
Abstract: 本发明涉及一种端粒酶催化亚基TERT表达量检测试剂盒及其检测方法，所述试剂盒包括端粒酶TERT基因和内参GAPDH基因的RT‑PCR引物及探针、端粒酶TERT基因和内参GAPDH基因特异性的逆转录引物、阳性对照质控品和阴性对照质控品。本发明选择两种不同颜色标记的TaqMan探针分别检测内参基因及端粒酶cDNA，端粒酶活性检测准确度可达98％以上，准确度远高于现有的端粒酶活性检测技术；定量PCR法全程闭环操作，无产物交叉污染，操作简单，具有良好的市场应用前景。
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公开(公告)号：CN105567718B
公开(公告)日：2021-11-09
申请号：CN201610044291.3
申请日：2016-01-22
Applicant: 东华大学
Abstract: 本发明涉及一种同时表达多个sgRNA的载体的构建方法，将待串联的n个sgRNA分别插入相应的42230载体；通过PCR扩增，扩增出sgRNA2的表达框，然后通过无缝克隆在第一个sgRNA1表达载体上的EcoR I位点实现第二个sgRNA2表达框的插入，得到同时表达2个sgRNA的载体；然后通过PCR扩增，扩增出sgRNA3的表达框，然后通过无缝克隆在42230‑sgRNA1+2上的EcoR I位点实现第三个sgRNA3表达框的插入，得到同时表达3个sgRNA的载体，依次操作，即得。本发明可以同时实现基因家族成员的同时敲除，解决了现有方法的不足。
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公开(公告)号：CN105695581B
公开(公告)日：2020-03-10
申请号：CN201610136155.7
申请日：2016-03-10
Applicant: 东华大学 , 上海翼和应用生物技术有限公司
IPC: C12Q1/6869
Abstract: 本发明涉及一种基于二代测试平台的中通量基因表达分析方法，包括：按照多个基因的相对表达量将相应的PCR引物分为两组，并在组内调整引物浓度比例；构建标准品竞争性模板和待测样品竞争性模板，进行三轮多重竞争性PCR反应；混合第三轮反应产物作为二代测试平台文库上机测序，提取数据并分析，即可得到不同样本间多个基因相对表达量差异。本发明基于高速发展的二代测序平台，准确快速定量目标模板和内参照模板，并可以同时对多个样本进行5个目的基因表达差异分析，流程简单易行，价格低廉；当需要分析多样本间多基因表达差异时，不失为一种具有高准确度，通量适中，成本廉价的方法。
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公开(公告)号：CN104651401B
公开(公告)日：2019-03-08
申请号：CN201510098102.6
申请日：2015-03-05
Applicant: 东华大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/65 , C12N15/113
Abstract: 本发明涉及一种mir‑505双等位基因敲除的方法，包括：构建两种针对mir‑505基因的打靶载体，在哺乳动物细胞中通过CRISPR/Cas系统介导打靶载体对mir‑505基因进行替换敲除，利用G418抗性筛选得到mir‑505单等位基因敲除细胞，并在该细胞基础上再一次利用CRISPR/Cas系统和绿色荧光打靶载体作用对另一条mir‑505进行敲除，通过荧光筛选得到mir‑505双等位基因敲除的细胞。本发明为构建基因彻底敲除细胞模型提供帮助，具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN103866009B
公开(公告)日：2016-08-17
申请号：CN201410067044.6
申请日：2014-02-26
Applicant: 东华大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明涉及一种改进的茎环引物qRT?PCR检测miRNA的方法，包括：（1）miRNA检测引物的设计：茎环引物包括两部分，通用的茎环序列和与靶标miRNA3’端互补配对的特异引物序列，其中与靶标miRNA互补配对的碱基数为11bp；qPCR的下游引物针对通用的茎环序列，上游引物针对靶标miRNA的5’端；在所述上游引物的5’末端增加GC尾巴，以使上下游引物的退火温度相近；（2）将靶标miRNA反转录成cDNA；（3）定量PCR扩增并采用SYBR Green qPCR检测法进行检测。本发明的方法特异性好、灵敏性高，且只需合成一种下游引物，采用SYBR Green I荧光染料法，大大节约了成本。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN105567718A
公开(公告)日：2016-05-11
申请号：CN201610044291.3
申请日：2016-01-22
Applicant: 东华大学
CPC classification number: C12N15/66 , C12N15/85 , C12N2800/107 , C12N2800/80 , C12N2810/10
Abstract: 本发明涉及一种同时表达多个sgRNA的载体的构建方法，将待串联的n个sgRNA分别插入相应的42230载体；通过PCR扩增，扩增出sgRNA2的表达框，然后通过无缝克隆在第一个sgRNA1表达载体上的EcoR I位点实现第二个sgRNA2表达框的插入，得到同时表达2个sgRNA的载体；然后通过PCR扩增，扩增出sgRNA3的表达框，然后通过无缝克隆在42230-sgRNA1+2上的EcoR I位点实现第三个sgRNA3表达框的插入，得到同时表达3个sgRNA的载体，依次操作，即得。本发明可以同时实现基因家族成员的同时敲除，解决了现有方法的不足。
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公开(公告)号：CN104388456A
公开(公告)日：2015-03-04
申请号：CN201410605326.7
申请日：2014-10-31
Applicant: 东华大学
IPC: C12N15/66
Abstract: 本发明涉及一种同时表达两条sgRNA的载体的构建方法，包括：体外合成单链核苷酸链，并形成DNA双链片段；利用PCR体系，将两条单链核苷酸退火并延伸为双链DNA片段，电泳进行鉴定；42229载体用Bbs I进行酶切，线性化后的载体42229和退火延伸后的插入片段通过同源重组的方法进行片段插入，即可。本发明在多基因位点敲除中简化后续的载体纯化和转染步骤，提高基因敲除的效率。
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公开(公告)号：CN101463389A
公开(公告)日：2009-06-24
申请号：CN200810207238.6
申请日：2008-12-18
Applicant: 东华大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明涉及基于荧光通用引物的多重定量RT－PCR基因表达谱分析方法，包括下列步骤：(1)通用引物及上下游嵌合特异引物的引物序列设计，通用引物的长度为20bp，上游通用引物5’端用Fam荧光标记，嵌合特异引物长度为38bp，3’端为特异引物序列段，5’端为通用引物序列段；(2)多重RT－PCR反应过程；(3)测序仪凝胶电泳予以分析检测。本发明适用于10－30个基因/反应的研究特定药物代谢途径或信号传导通路等特定候选基因表达分析，是一种对于定量的、高通量的、经济的基因表达分析简单最佳的多重解决方案。
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公开(公告)号：CN119776556A
公开(公告)日：2025-04-08
申请号：CN202411785750.4
申请日：2024-12-06
Applicant: 东华大学 , 上海翼和应用生物技术有限公司
Abstract: 本发明公开了一组用于细菌检测的高保守引物及应用。本发明通过对微生物16S rRNA基因序列进行高效比对和筛选后，开发一组用于快速、精准的外源微生物检测方法的高保守引物。其主要应用于细胞和基因治疗产品的质量控制。本发明通过使用高度保守的16S rRNA引物设计方法，结合简并碱基和概率分析，确保了检测的广泛覆盖率和高度特异性；能够覆盖98％以上的目标微生物。本发明设计的引物兼具高效性与灵活性，能够根据具体的检测需求，兼容TaqMan探针和SYBR Green荧光染料体系，适用于多种微生物检测场景，确保了检测的多样性和适用性。
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公开(公告)号：CN114703212A
公开(公告)日：2022-07-05
申请号：CN202210194874.X
申请日：2022-03-01
Applicant: 东华大学
Abstract: 本发明公开了一种运用特定区段随机突变法改造漆酶的方法及漆酶菌株lac123。本发明通过分析，选定LAC1第二结构域和第三结构域靠近漆酶活性位点附近的重要功能区段作为靶标序列，在对该序列DNA进行化学合成时，采用简并引物法在特定的若干个碱基位点引入随机突变，并将合成好的随机片段通过同源重组的方法，对野生酶的相同片段进行替换，构建包含特异区段特定位点DNA序列的随机突变库，通过二代测序对库容量进行检测，并对随机突变库中的大肠杆菌克隆进行漆酶活性的批量筛选，初筛到了5株酶活有所提升的漆酶，经过摇瓶复筛得到一株酶活提升2.3倍的突变漆酶菌株LAC123，其表达蛋白序列如SEQ ID NO:3所示。
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