一种细胞保存液及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN117598289A

    公开(公告)日:2024-02-27

    申请号:CN202311632305.X

    申请日:2023-12-01

    Abstract: 本发明公开了一种细胞保存液,其组分每毫升包括:右旋糖酐0.01‑0.08mg,海藻酸钠0.05‑0.25mg,谷胱甘肽0.1‑0.6mg,银杏酸0.1‑0.4mg,二水L‑酪氨酸二钠0.01‑0.05mg,L‑胱氨酸二盐酸0.01‑0.05mg,十二烷基硫酸钠0.1‑0.6μg,葡聚糖0.05‑0.15g,聚乙二醇1‑3mg,非必须氨基酸2‑6mg,人血白蛋白5‑15mg。本发明公开了上述细胞保存液使用方法,包括如下步骤:将外周血单核细胞与上述细胞保存液混合均匀得到细胞悬浮液,移入无菌冻存管然后放入冻存盒中,程序降温至‑50~‑60℃,冻存5‑15h,然后转入液氮中冻存。

    一种体外高效扩增NK细胞的培养基和培养方法

    公开(公告)号:CN116574680A

    公开(公告)日:2023-08-11

    申请号:CN202310526293.6

    申请日:2023-05-10

    Abstract: 本发明公开了一种体外高效扩增NK细胞的培养基,包括:培养基A、培养基B和培养基C;培养基A的组分包括:RPMI‑1640培养基、重组人胰岛素、人血清白蛋白、胆固醇;培养基B的组分包括:GT‑T551培养基、苦瓜多肽、大豆异黄酮、谷氨酰胺、抗CD3抗体、维生素C;培养基C的组分包括:RPMI‑1640培养基、GT‑T551培养基、人血清白蛋白、FK506、IL‑15、OK‑432、IL‑21。本发明还公开了一种体外高效扩增NK细胞的培养方法,(1)将单个核细胞接种于上述培养基A中培养;(2)将步骤(1)培养细胞接种于上述培养基B中培养;(3)将步骤(2)培养细胞接种于上述培养基C中培养。

    一种NK细胞冻存液及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN115974081A

    公开(公告)日:2023-04-18

    申请号:CN202310061239.9

    申请日:2023-01-16

    Abstract: 本发明涉及一种NK细胞冻存液及其制备方法和应用,所述NK细胞冻存液包括人血白蛋白、聚乙二醇、二甲基亚砜、右旋糖酐、维生素B12、氯化钠和水。本发明创造性地发现使用人血白蛋白、聚乙二醇、二甲基亚砜、右旋糖酐、维生素B12和氯化钠组成的NK细胞冻存液冻存细胞,可以提高细胞的存活率,减少NK细胞在冻存复苏过程中受到的伤害,且细胞复苏后具有良好增殖和杀伤能力。

    一种高纯度NK细胞体外扩增培养方法

    公开(公告)号:CN114891743A

    公开(公告)日:2022-08-12

    申请号:CN202210716229.X

    申请日:2022-06-23

    Abstract: 本发明公开了一种高纯度NK细胞体外扩增培养方法,包括如下步骤:向GT‑T551基础培养基中加入IL‑2、IL‑12、IL‑15、IL‑17、黄芩素、姜黄素、云芝多糖,得到NK细胞培养基;NK细胞培养基中,IL‑2的浓度为500‑600μg/mL,黄芩素的浓度为10‑20μg/mL,姜黄素的浓度为10‑20μg/mL,云芝多糖的浓度为15‑25μg/mL;采集并分离自体外周血的单个核细胞,加入至NK细胞培养基中重悬细胞,加入细胞培养瓶中,置于37℃、5%二氧化碳的培养箱中孵育,每隔2天,补加含IL‑2的GT‑T551培养基,培养至第7天,扩瓶培养;培养至第14天,获得高纯度NK细胞。

    一种采用K562细胞扩增NK细胞的方法

    公开(公告)号:CN114874986A

    公开(公告)日:2022-08-09

    申请号:CN202210682587.3

    申请日:2022-06-16

    Abstract: 本发明公开了一种采用K562细胞扩增NK细胞的方法,包括如下步骤:采用重组慢病毒对K562细胞进行感染,感染时间为10‑20h,通过流式细胞术和有限稀释法进行克隆得到工程细胞株;然后采用钴‑60辐照灭菌得到滋养细胞;采用外周血分离单个核细胞,然后加入至NK细胞完全培养基中重悬,加入滋养细胞混合均匀,置于37℃、二氧化碳浓度为2‑6%的培养箱中培养;培养至第3天时,离心弃掉上清液,加入相同体积的NK细胞完全培养基混合均匀,继续置于37℃、二氧化碳浓度为2‑6%的培养箱中培养;培养至第7天,补加1‑2μg/mLIFN‑γ和自体血浆;继续培养至第14天得到采用K562细胞扩增的NK细胞。

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