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公开(公告)号:CN119120366A
公开(公告)日:2024-12-13
申请号:CN202411548434.5
申请日:2024-11-01
Applicant: 杭州中赢生物医疗科技有限公司
IPC: C12N5/0783 , C12N5/0781 , C12N5/071 , C12N5/09 , C12N5/04 , C12M1/00 , C12M1/12
Abstract: 本发明涉及一种破碎细胞的方法及其应用,所述破碎细胞的方法包括:将细胞悬液在外力作用下来回穿过滤膜,获得所述破碎细胞,所述滤膜的孔径小于细胞直径且大于细胞核直径。本发明通过挤滤法破碎细胞,当压力较大时,或细胞壁、细胞膜比较脆弱时,部分细胞通过滤膜时会被挤碎,重复多次即可达到破碎大部分细胞的目的。该方法噪音小,通过差速离心的顺序组合可去除或收集细胞组分,且该方法可无菌操作,无化学添加物,不污染细胞,具有广泛的应用前景。
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公开(公告)号:CN114874984B
公开(公告)日:2024-05-03
申请号:CN202210681141.9
申请日:2022-06-16
Applicant: 杭州中赢生物医疗科技有限公司
IPC: C12N5/0783
Abstract: 本发明公开了一种采用植物提取物体外诱导扩增NK细胞的方法,向Cellgro基础培养基中加入OK‑432、IL‑2、IL‑15、IL‑21和复合中药提取物得到诱导培养基;向Cellgro基础培养基中加入rhGM‑CSF、rhIL‑4、复合中药提取物得到增殖培养基;无菌采集外周血,向外周血中加入DPBS进行稀释,然后向其中加入Ficoll分离液,离心,洗涤得到外周血单个核细胞;将所得外周血单个核细胞稀释,然后加入诱导培养基中重悬,加入anti‑CD137,培养2‑3h;然后加入增殖培养基培养至第4天,补加IL‑2、IL‑15和IL‑21;培养到第7天,扩瓶培养;培养至第14天获得扩增的NK细胞。
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公开(公告)号:CN114196628B
公开(公告)日:2024-03-19
申请号:CN202111572220.8
申请日:2021-12-21
Applicant: 杭州中赢生物医疗科技有限公司
IPC: C12N5/0783
Abstract: 本发明涉及细胞培养技术领域,尤其涉及一种NK细胞的培养基及培养方法。采用本发明提供的培养基培养PBMC,获得的NK细胞(CD3‑CD56+)平均纯度达到80%以上,平均扩增倍数达4076倍(按照起始培养NK细胞占比PBMC7.5%计),细胞杀伤活性(效靶比为20:1)5小时杀伤80%以上。
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公开(公告)号:CN116636526A
公开(公告)日:2023-08-25
申请号:CN202310610214.X
申请日:2023-05-25
Applicant: 杭州中赢生物医疗科技有限公司
IPC: A01N1/02
Abstract: 本发明公开了一种细胞保存液,其组分包括:乙二胺四乙酸二钠0.1‑1mg/mL,D‑甘露醇20‑26μg/mL,五羟黄酮10‑16μg/mL,L‑谷氨酰胺1‑3mg/mL,山柰素‑3‑鼠李葡糖苷0.2‑0.6mg/mL,木兰花碱1‑2mg/mL,羟乙基淀粉10‑14mg/mL,二硫苏糖醇0.01‑0.1mg/mL,氯化钠9mg/mL,人血清白蛋白0.5‑1.5mg/mL。本发明还公开了上述细胞保存液的应用。本发明还公开了一种细胞保存方法,将细胞悬浮于上述细胞保存液中得到细胞悬液;将细胞悬液分装在冻存管中,在温度为10‑15℃环境中保存。
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公开(公告)号:CN112553157B
公开(公告)日:2023-07-07
申请号:CN202011538923.4
申请日:2020-12-23
Applicant: 杭州中赢生物医疗科技有限公司
IPC: C12N5/0783 , C12N5/09 , C12N5/10
Abstract: 本发明涉及细胞培养技术领域,尤其涉及一种淋巴细胞的扩增体系及扩增方法。该扩增体系包括组分1和组分2;组分1包括灭活的基因工程细胞1、胎牛血清IL‑2和淋巴细胞基础培养基;组分2为含灭活的基因工程细胞2的淋巴细胞基础培养基;基因工程细胞1为表达CD80、IL21、IL12的滋养细胞;基因工程细胞2为表达CD80、IL12的滋养细胞。本发明利用该扩增体系与NK细胞共培养,14天获得的NK细胞的存活率达92%,NK细胞扩增倍数约5000倍,达到各种临床适合治疗病症预期疗效应用要求;同时可以有效降低NK细胞的应用成本,为NK细胞过继免疫治疗的广谱应用奠定了基础。
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公开(公告)号:CN116140218A
公开(公告)日:2023-05-23
申请号:CN202310061378.1
申请日:2023-01-16
Applicant: 杭州中赢生物医疗科技有限公司
Abstract: 本发明涉及一种扩增激活NK细胞的培养基组合及其制备方法和应用,所述培养基组合包括诱导培养基、扩增培养基和激活培养基;所述诱导培养基包括基础培养基和诱导组分、所述扩增培养基包括基础培养基和扩增组分、所述激活培养基包括基础培养基和激活组分;所述基础培养基含有血清。本发明所述培养基组合,既可以活化外周血单个核细胞中的多种免疫细胞,同时对纯化的NK细胞,也可以模拟抗原提呈细胞识别抗原后被活化的状态。三种培养基相辅相成,使得培养得到的NK细胞在扩增倍数、细胞纯度和对肿瘤细胞的杀伤活性等方面都优于现有技术,且与使用滋养层细胞体外扩增NK细胞相比,该培养基组合不使用外来肿瘤细胞,安全性比较好。
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公开(公告)号:CN114874985A
公开(公告)日:2022-08-09
申请号:CN202210682580.1
申请日:2022-06-16
Applicant: 杭州中赢生物医疗科技有限公司
IPC: C12N5/0783
Abstract: 本发明公开了一种NK细胞的高纯度高效率扩增方法,包括如下步骤:向GT‑T551H3培养液中添加自体血浆、150‑250IU/mLIL‑2、1‑5μg/mL紫草提取物得到培养基组A;向GT‑T551H3培养液中添加自体血浆、150‑250IU/mLIL‑2、10‑30ng/mLIL‑15、50‑100ng/mLIL‑21、1‑5μg/mL紫草提取物,得到培养基组B;从外周血或脐带血中分离单个核细胞;将单个核细胞悬浮于培养基组A中培养3天,细胞浓度为2‑4×106/mL,补加培养基组A,继续培养至第7天;然后补加培养基组B,连续培养至第14天,培养过程中每隔一天补加培养基组B,得到扩增的NK细胞。
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公开(公告)号:CN116649328A
公开(公告)日:2023-08-29
申请号:CN202310526289.X
申请日:2023-05-10
Applicant: 杭州中赢生物医疗科技有限公司
IPC: A01N1/02
Abstract: 本发明公开了一种人类活性免疫细胞冻存液,其组分包括:聚乙二醇1‑2.5mg/ml,1,3‑丙二醇1‑3mg/ml,半乳糖胺0.01‑0.05mg/ml,唾液酸0.01‑0.05mg/ml,葡聚糖0.1‑0.3mg/ml,海藻糖0.1‑0.5mg/ml,苜蓿素0.1‑0.2mg/ml,壬基酚聚氧乙烯醚‑100.1‑0.4μg/ml,草酸钙0.01‑0.02mg/ml,壳聚糖0.1‑0.5mg/ml,非必须氨基酸5‑15mg/ml,人血白蛋白10‑20mg/ml;聚乙二醇相对分子质量为800‑1200。本发明还公开了一种人类活性免疫细胞的冻存方法。本发明还公开了一种人类活性免疫细胞的冻存复苏方法。
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公开(公告)号:CN112501104B
公开(公告)日:2022-09-09
申请号:CN202011538952.0
申请日:2020-12-23
Applicant: 杭州中赢生物医疗科技有限公司
IPC: C12N1/21 , C12N5/0783 , C12R1/225 , C12R1/01 , C12R1/19
Abstract: 本发明涉及细胞培养技术领域,尤其涉及基因工程细菌及其在淋巴细胞扩增中的应用。本发明利用异体原核生物作为滋养层细胞,通过基因工程手段获表达CD137L、IL21和CD4中至少一种蛋白的基因工程细菌,将该基因工程细菌表达用于扩增淋巴细胞,具有扩增效率高、安全性好的优点,且成本更低。实现结果表明,利用本发明基因工程细菌扩增纯化的NK细胞或未经纯化的淋巴细胞,NK细胞14天分别增长25892.99倍、30150.22倍。其中,对未经纯化的淋巴细胞进行培养,获得NK细胞的纯度达98.5%,显著优于传统因子培养以及现有滋养细胞技术的培养效果。
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公开(公告)号:CN114874984A
公开(公告)日:2022-08-09
申请号:CN202210681141.9
申请日:2022-06-16
Applicant: 杭州中赢生物医疗科技有限公司
IPC: C12N5/0783
Abstract: 本发明公开了一种采用植物提取物体外诱导扩增NK细胞的方法,向Cellgro基础培养基中加入OK‑432、IL‑2、IL‑15、IL‑21和复合中药提取物得到诱导培养基;向Cellgro基础培养基中加入rhGM‑CSF、rhIL‑4、复合中药提取物得到增殖培养基;无菌采集外周血,向外周血中加入DPBS进行稀释,然后向其中加入Ficoll分离液,离心,洗涤得到外周血单个核细胞;将所得外周血单个核细胞稀释,然后加入诱导培养基中重悬,加入anti‑CD137,培养2‑3h;然后加入增殖培养基培养至第4天,补加IL‑2、IL‑15和IL‑21;培养到第7天,扩瓶培养;培养至第14天获得扩增的NK细胞。
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