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公开(公告)号：CN106755016B
公开(公告)日：2019-09-17
申请号：CN201611094281.7
申请日：2016-12-02
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种雅致放射毛霉羧肽酶Y基因及其应用，属于生物技术领域。本发明所述的羧肽酶Y基因全长是通过提取雅致放射毛霉的RNA，反转录获得cDNA后，通过末端扩增技术(RACE)获得的，该基因全长1557bp，编码518个氨基酸。本发明为首次从雅致放射毛霉菌PEP001(A.elegans PEP001)中成功克隆出CPY基因全长，并将其编码基因在GS115中进行重组表达。酶原经过体外激活、纯化，测定了成熟CPY的基本酶学性质，为对其进行更深入的研究提供前提条件。
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公开(公告)号：CN110184259A
公开(公告)日：2019-08-30
申请号：CN201910612907.6
申请日：2019-07-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种厌氧芽孢杆菌来源普鲁兰酶突变体及其应用，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明构建的普鲁兰酶突变体K419R，在热稳定性与野生型普鲁兰酶相差不大的情况下，其比酶活是野生型普鲁兰酶的1.30倍；普鲁兰酶突变体K419R/T245C/A326C，在比酶活与野生型普鲁兰酶相同的情况下，其热稳定性较野生型大幅提升；而突变体K419R/T245C/A326C/W651C/V707C的比酶活是野生型的1.47倍，且具有良好的热稳定性。因此本发明的普鲁兰酶突变体能够满足淀粉脱支过程高温条件的要求，同时提高淀粉脱支和水解效率，对于普鲁兰酶的工业化应用至关重要。
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公开(公告)号：CN106479948B
公开(公告)日：2019-06-21
申请号：CN201611166229.8
申请日：2016-12-16
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/75 , C12C11/00 , C12N9/44 , C12P7/06 , C12P19/16 , C12P19/00 , C12P19/04 , C12R1/125
CPC classification number: Y02E50/17
Abstract: 本发明公开了一种提高枯草芽孢杆菌普鲁兰酶分泌的方法，属于发酵工程领域。本发明通过构建重组表达普鲁兰酶的枯草芽孢杆菌，并在以此重组菌发酵生产普鲁兰酶的过程中，添加终浓度为0.4％的甜菜碱或0.2％的吐温‑80或0.4％的司盘80，普鲁兰酶的分泌效率可以达到76.13％、68.72％和72.84％，胞外pulA酶活分别达到22.95IU/ml、19.13IU/ml、20.11IU/ml。
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公开(公告)号：CN109402097A
公开(公告)日：2019-03-01
申请号：CN201811234783.4
申请日：2018-10-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种L-天冬氨酸α-脱羧酶的基因工程菌株以及应用，具体涉及一种以L-天冬氨酸α-脱羧酶的基因工程菌株催化合成β-丙氨酸的方法和应用，属于基因工程技术领域。本发明通过建立并优化全细胞催化工艺，采用底物分批补加的方式，加入四次底物后，野生型重组菌株转化23h生成β-丙氨酸约123.81g/L；K221R突变株转化23h可使产物β-丙氨酸浓度达到134.72g/L；G369A突变株转化23h可使产物β-丙氨酸浓度达到136.33g/L。此方法使β-丙氨酸产量得到较大提高，这一发现对于工业化制备β-丙氨酸具有重要的应用价值。
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公开(公告)号：CN109370997A
公开(公告)日：2019-02-22
申请号：CN201811415904.5
申请日：2018-11-26
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种苯丙氨酸氨基变位酶突变体，属于酶工程技术领域。本发明的苯丙氨酸氨基变位酶的突变体序列如SEQ ID NO.2所示，该突变酶的比酶活相对于野生型提高了1.13倍，在50℃处理1小时仍有50％残留酶活性，温度稳定性相比野生酶有了较大的提高。同时该突变体也具备了更好的pH稳定性，有利于以后的工业生产。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN109055346A
公开(公告)日：2018-12-21
申请号：CN201811131112.5
申请日：2018-09-27
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种热稳定性提高的L‑天冬氨酸‑α‑脱羧酶，属于基因工程技术领域。本发明通过对来源于赤拟谷盗的L‑天冬氨酸‑α‑脱羧酶进行定点突变，获得K49R，G369A和K221R三个酶突变体，将突变体重组质粒转化至大肠杆菌BL21中，表达分离纯化后，催化底物L‑天冬氨酸生成β‑丙氨酸。在50℃处理温度下，K49R可以使热稳定性相较于野生酶提高14％，G369A可以使热稳定性相较于野生酶提高20％，K221R可以使热稳定性相较于野生酶提高23％。其中，K221R还可以使比酶活达到约320U/g，相较于野生酶酶活提高了23％。这一发现对于工业化制备β‑丙氨酸具有重要的研究价值。
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公开(公告)号：CN108103120A
公开(公告)日：2018-06-01
申请号：CN201711374147.7
申请日：2017-12-19
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种双酶偶联全细胞催化马来酸合成L‑天冬氨酸的方法，属于生物工程领域。本发明构建了一种偶联表达马来酸顺反异构酶和L‑天冬氨酸裂解酶的重组菌株，并对该重组菌株进行改造优化，获得能够全细胞高转化率催化马来酸生成L‑天冬氨酸的重组菌。该重组菌株能够利用价格相对便宜的马来酸生成L‑天冬氨酸，反应40～120min，马来酸反应完全，而且几乎没有中间产物富马酸的积累，转化率到达98％以上。
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公开(公告)号：CN106479948A
公开(公告)日：2017-03-08
申请号：CN201611166229.8
申请日：2016-12-16
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/75 , C12C11/00 , C12N9/44 , C12P7/06 , C12P19/16 , C12P19/00 , C12P19/04 , C12R1/125
CPC classification number: Y02E50/17 , C12N9/2457 , C12C11/00 , C12C2200/05 , C12P7/06 , C12P19/00 , C12P19/04 , C12P19/16 , C12Y302/01041
Abstract: 本发明公开了一种提高枯草芽孢杆菌普鲁兰酶分泌的方法，属于发酵工程领域。本发明通过构建重组表达普鲁兰酶的枯草芽孢杆菌，并在以此重组菌发酵生产普鲁兰酶的过程中，添加终浓度为0.4％的甜菜碱或0.2％的吐温-80或0.4％的司盘80，普鲁兰酶的分泌效率可以达到76.13％、68.72％和72.84％，胞外pulA酶活分别达到22.95IU/ml、19.13IU/ml、20.11IU/ml。
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公开(公告)号：CN104152523B
公开(公告)日：2016-09-28
申请号：CN201410364770.4
申请日：2014-07-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种生产高光学纯度D‑苯丙氨酸的方法，属于酶学与酶工程技术领域。本发明采用介孔材料MCM‑41为载体固定苯丙氨酸脱氨酶，不对称拆分DL‑苯丙氨酸生产高光学纯度的D‑苯丙氨酸。通过构建重组菌，高效表达，获得大量的重组酶，将重组酶进行固定化，制备高稳定性的酶催化剂，搭建填充床反应器，半连续生产D‑苯丙氨酸。采用本方法可以获得高纯度的D‑苯丙氨酸，以满足工业化生产需求。
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公开(公告)号：CN104830747A
公开(公告)日：2015-08-12
申请号：CN201510244547.0
申请日：2015-05-13
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高效表达高分子量型腈水合酶的基因工程菌及其应用，属于微生物基因工程技术领域。本发明所述的高分子量型腈水合酶基因nhhB(rbs)A(rbs)G是基于R.rhodochrous J1来源的腈水合酶基因bag，经密码子优化及表达元件改造之后化学合成得到，该基因全长1645bp，编码533个氨基酸，能够在大肠杆菌中成功表达。该方法高效安全，在24℃诱导16h即可获得96.7U/mL可溶性腈水合酶，纯化后比酶活高达234U/mg。该方法有利于生产过程中腈水合酶的提取纯化以及酰胺类物质的高效酶法合成。
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