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公开(公告)号：CN106544322B
公开(公告)日：2019-10-08
申请号：CN201611108955.4
申请日：2016-12-06
Applicant: 东华大学
Abstract: 本发明涉及一种用于研究Kiss1基因表达调控的报告系统及其构建方法，所述系统为红色荧光蛋白稳定表达，绿色荧光受Kiss1表达调控元件调控的双荧光Kiss1基因表达调控报告系统。构建方法包括：构建红色荧光蛋白打靶载体Ai9‑dtomato；构建绿色荧光蛋白打靶系统；EGFP受Kiss1表达调控元件控制的Cas9‑GT1‑7‑Kiss1‑2A‑EGFP细胞的构建；插入稳定表达的红色荧光背景，即得。本发明实现对研究对象对Kiss1作用效应的量化评估。
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公开(公告)号：CN105177126B
公开(公告)日：2018-12-04
申请号：CN201510520015.5
申请日：2015-08-21
Applicant: 东华大学
IPC: C12Q1/6888 , C12Q1/686
Abstract: 本发明涉及一种利用荧光PCR技术对小鼠的分型鉴定方法，利用荧光PCR引物，经PCR扩增后将产物与已知片段大小的ROX混合，利用377测序，使用Genemapper软件计算出PCR产物的大小，从而达到鉴定小鼠基因型的目的，即可。本发明简单直接准确的鉴定出Crispr/Cas9敲除的mircoRNA小鼠。
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公开(公告)号：CN103725759B
公开(公告)日：2017-11-10
申请号：CN201210382385.3
申请日：2012-10-10
Applicant: 上海西普尔-必凯实验动物有限公司 , 东华大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明涉及1号染色体替换野生小家鼠C57BL/6.松江3‑Chr1的建立。构建了一种新的染色体C57BL/6替代实验小鼠品系，该小鼠品系的遗传背景以C57BL/6小鼠为主，但其中1号染色体以松江3小鼠为主。本发明的染色体替换品系可用于研究在相同基因组背景下，由不同的1号染色体基因组带来的性状差异，是采用遗传学方法研究染色体基因组功能的有用工具。
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公开(公告)号：CN104894071A
公开(公告)日：2015-09-09
申请号：CN201510311719.1
申请日：2015-06-08
Applicant: 东华大学
Abstract: 本发明涉及一种对GT1-7细胞进行基因编辑的方法，包括：将GT1-7细胞铺于24孔板中；待细胞贴壁生长，将含有Cas9基因和嘌呤霉素抗性基因的42229质粒转染进入GT1-7细胞系；待细胞表达嘌呤霉素基因，用嘌呤霉素筛选42229转染GT1-7细胞；筛选后，去除含有嘌呤霉素的培养基，更换成正常高糖培养基，并进行扩大培养，待培养板中的GT1-7细胞长满，消化转移到培养瓶中继续扩大培养，即得Cas9稳转GT1-7细胞。本发明在实际应用中只需要转染特定的sgRNA质粒就能对GT1-7细胞靶基因进行精确的基因编辑，避免了Cas9质粒较大对于转染效率的影响，具有良好的应用前景。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN103710372B
公开(公告)日：2015-08-12
申请号：CN201310754411.5
申请日：2013-12-31
Applicant: 东华大学
IPC: C12N15/66
Abstract: 本发明涉及一种用于功能研究的miR-505高表达载体的构建方法，包括：（1）采用PCR方法得到shRNA基因，并用限制性内切酶EcoRI进行酶切，得到经EcoRI酶切后的miR-505片段；（2）将FUGW载体或Fsy载体用EcoRI进行酶切，并CIAP处理使其5’端去磷酸化，然后将处理后的线性化FUGW载体或Fsy载体与经EcoRI酶切后的miR-505片段进行连接，转化至大肠杆菌感受态细胞DH5α，提取质粒，经PCR和BamHI酶切检测目的基因插入的方向和拷贝数，测序确认后，得到表达载体。本发明的构建方法操作简单，得到的载体可实现miR-505成熟体在哺乳动物细胞中的高表达。
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公开(公告)号：CN104372083A
公开(公告)日：2015-02-25
申请号：CN201410606864.8
申请日：2014-10-31
Applicant: 东华大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明涉及一种逆转录miR-505的茎环引物的设计方法，包括：以miRNA-505-3P基因为特异性的转录本，分别将该逆转录茎环引物的茎部碱基对的数量和环部的碱基个数规律的设计对应的几个梯度，经过对miRNA-505-3P的逆转录和real time-PCR检测，最终筛选出一个对于miRNA-505-3P基因特异性逆转录时效率最佳的逆转录茎环引物。本发明避免了对成熟体检测的干扰，通过茎环引物在茎部和环部的梯度性的调整，可以分别明确的看出环部碱基的结构和茎部碱基的结构分别对逆转录茎环引物的逆转录效率的影响，因此更容易设计出合理高效的逆转录引物。
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公开(公告)号：CN104215471A
公开(公告)日：2014-12-17
申请号：CN201410469178.0
申请日：2014-09-15
Applicant: 东华大学
IPC: G01N1/06
Abstract: 本发明涉及一种microRNA原位杂交的冰冻切片的制备方法，包括：载玻片洁净处理，然后取洁净的载玻片，朝上面标记，滴加200ul浓度为0.1mg/ml多聚赖氨酸工作液；另取载玻片标记面向下，在注有溶液的载玻片上从一端相互反向将溶液推向另一端，直至标记处停止，平放，烘干，干燥后分开，得到防脱玻片；用冰冻切片包埋剂预先浸润组织表面，固定到切片托上，冷冻腔放置，待组织块至表面白色，全部冷冻后放入切片机冷冻夹上进行切片，即得。本发明中玻片易于标准化制作，操作简单，节约试剂，切片制作参数固定，特征明显，易于学习。
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公开(公告)号：CN103820552A
公开(公告)日：2014-05-28
申请号：CN201410067737.5
申请日：2014-02-26
Applicant: 东华大学
IPC: C12Q1/68
CPC classification number: C12Q1/6851 , C12Q2531/113 , C12Q2561/113 , C12Q2545/113
Abstract: 本发明涉及一种用于检测小鼠胆固醇代谢基因表达的实时定量PCR芯片，该实时定量PCR芯片以与胆固醇代谢密切相关的88基因作为检测位点，并选取了4个看家基因。本发明的实时定量PCR芯片能对小鼠胆固醇代谢相关基因进行针对性分析，实验周期短，数据处理简单，花费少，且不需要专门的实验机构检测，只要拥有一台定量PCR仪，本发明的实时定量PCR芯片的扩增效率高，定量结果可靠，重复性好，特异性高。
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公开(公告)号：CN101921828A
公开(公告)日：2010-12-22
申请号：CN201010102179.3
申请日：2010-01-28
Applicant: 东华大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明涉及一种检测农田生态环境的高通量多重LDR分型试剂盒，包括：农田16种物种的线粒体COI基因通用引物，上游：5′-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3′；下游：5′-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3′；农田16种物种的线粒体COI基因的特异探针序列；以及PCR扩增和LDR检测程序所用试剂。本发明的试剂盒针对COI基因的通用引物有效扩增出所有目标物种序列，保证了各目标序列以及其中低拷贝的模板可被检测到；各目标物种的特异探针进一步又保证了特异性，使各目标序列完全区分出来，实现多重分型定量，从而了解田间捕食结构的变化，维护农田生态环境。
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