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公开(公告)号：CN118497098A
公开(公告)日：2024-08-16
申请号：CN202410734747.3
申请日：2024-06-07
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高产琥珀酸重组大肠杆菌的构建方法及其应用，属于生物工程技术领域。本发明通过转录组分析筛选，得到有效靶点aaeA，进一步通过在E.coli FMME‑N‑5中过表达aaeA基因，采用启动子、RBS以及拷贝数优化调节aaeA的表达水平，构建了工程菌株E.coli FMME‑N‑5‑aaeA。将本发明构建的重组大肠杆菌采用两阶段发酵策略发酵72h，琥珀酸产量可达150.76g/L，全阶段琥珀酸得率达0.90g/g葡萄糖，生产强度2.09g/L/h，副产物甲酸不积累，乳酸、乙酸低于5g/L，菌株不含质粒，不存在质粒丢失的风险，发酵时不加入抗生素，具有应用于工业化生产的潜力。
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公开(公告)号：CN117965492A
公开(公告)日：2024-05-03
申请号：CN202410059317.6
申请日：2024-01-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种重组酸性磷酸酶突变体及其在合成磷酸吡哆醛中的应用，属于生物工程技术领域。所述酸性磷酸酶突变体，是将酸性磷酸酶的第57位、第58位、第59位、第60位、第91位、第96位和第124位的氨基酸中的一个或多个进行突变得到的。与野生型酸性磷酸酶StAPase相比，突变体比酶活提高3.5倍，催化效率提升4.87倍。本发明先通过构建重组酸性磷酸酶，以吡哆醇盐酸盐为底物，生成中间产物磷酸吡哆醇；再以磷酸吡哆醇为底物，生产最终产物磷酸吡哆醛，中间产物吡哆醇的转化率可达62％，极大的提升了本路径限速步骤的转化率，提高了单位催化剂的生产能力和催化剂的反应效率，降低了反应的成本。
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公开(公告)号：CN116426455A
公开(公告)日：2023-07-14
申请号：CN202310607545.8
申请日：2023-05-26
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种重组大肠杆菌及其构建方法与其在生产3‑脱氢莽草酸中的应用。本发明所述重组大肠杆菌在大肠杆菌宿主菌中，敲除3‑脱氢莽草酸脱氢酶基因aroE、负调控转录抑制因子tyrR、乙酸激酶基因ackA、丙酮酸脱氢酶基因poxB和奎尼酸脱氢酶基因YdiB，并过量表达磷酸烯醇式丙酮酸合酶ppsA、转酮醇酶tktA和转醛缩酶talA、DHQ合酶aroB、3‑脱氢奎尼酸脱水酶aroD和抗反馈抑制的3‑脱氧‑D‑阿拉伯庚酮糖‑7‑磷酸(DAHP)合成酶基因aroGFBR。本发明发酵生产3‑脱氢莽草酸的工艺操作简单易行、培养基成本低廉，适用于工业化生产。
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公开(公告)号：CN116286701A
公开(公告)日：2023-06-23
申请号：CN202310078769.4
申请日：2023-02-03
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种不透明红球菌L‑氨基酸氧化酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明克服了野生型RoLAAO催化性能差的局限，通过麦芽糖蛋白工程及组合突变设计出突变体RoLAAOY226H/D227H/Y371L/A466C/W467A，其对五种选定底物催化效率为野生型的9.2‑82.8倍，能够以L‑氨基酸(L‑Leu、L‑Ile、L‑Met、L‑Val及L‑Phe)为底物规模化制备系列α‑酮酸(α‑酮亮氨酸、α‑酮异亮氨酸、α‑酮蛋氨酸、α‑酮缬氨酸及α‑苯丙酮酸)，对应产量>101g/L，转化率>95％，单位菌体生产α‑酮酸的能力在5.1‑5.5g/g，为多种α‑酮酸的工业化生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN116083518A
公开(公告)日：2023-05-09
申请号：CN202211096327.4
申请日：2022-09-08
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高通量筛选亮氨酸脱氢酶的方法及一种亮氨酸脱氢酶，利用本发明的方法对亮氨酸脱氢酶BtLDH进行蛋白质工程改造，并使用高通量筛选的方法，在96孔板中培养含亮氨酸脱氢酶BtLDH的重组菌株及菌株突变体，并进行转接诱导，离心收集含苏云金芽孢杆菌的亮氨酸脱氢酶BtLDH的细胞来转化2‑酮丁酸转化产生L‑2‑氨基丁酸，并利用2,4‑二硝基氟苯(DNFB)显色后于500nm处读取吸光值，并将吸光值大的菌株进行摇瓶验证，在短时间内成功筛选出各亮氨酸脱氢酶，其中最优突变体A262S产L‑2‑氨基丁酸9.22g/L，与野生型相比L‑2‑氨基丁酸产量提高3.04g/L。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN115725669A
公开(公告)日：2023-03-03
申请号：CN202211097246.6
申请日：2022-09-05
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种吡咯烷酮的制备方法，本发明提供一种利用肉碱辅酶A连接酶CaiC催化γ‑氨基丁酸制备吡咯烷酮的方法。所述肉碱辅酶A连接酶CaiC的氨基酸序列如SEQ IDNO:1所示。该连接酶具有催化γ‑氨基丁酸环化生成吡咯烷酮的活性。本发明提供的肉碱辅酶A连接酶以γ‑氨基丁酸为底物时24h吡咯烷酮的产量为3.26g/L，摩尔产率可达39.53％，减少了生产周期，提高了吡咯烷酮的产量，加快了酶转化法生产吡咯烷酮的工业化进程。
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公开(公告)号：CN115044627A
公开(公告)日：2022-09-13
申请号：CN202210720068.1
申请日：2022-06-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高效生产L‑高苯丙氨酸的方法及一种产L‑高苯丙氨酸的菌株，本发明设计了一条以廉价的苯甲醛和丙酮酸为原料，利用级联酶法合成L‑高苯丙氨酸的新路线，通过将路径酶构建到同一株大肠杆菌中，利用获得的重组大肠杆菌进行催化，在5L反应器中进行反应，产量在100.9g/L，转化率在94％，ee>99％。与目前主要的生产L‑HPA的方法相比，极大的降低了L‑高苯丙氨酸的生产成本，具有很好的应用前景。
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公开(公告)号：CN113025546A
公开(公告)日：2021-06-25
申请号：CN202110292484.1
申请日：2021-03-18
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种多酶级联转化L‑酪氨酸生产酪醇的方法，属于生物工程技术领域。本发明所述的生产方法在将中间产物转化为酪醇的过程中利用一辅酶再生体系，通过将NADP+转化为NADPH，降低反应成本，提高整体转化效率。更进一步地，通过模块化组装和基因重复表达实现各酶的平衡表达，避免了中间产物的积累。并从反应的pH、温度对催化体系进行优化，可使得酪醇产量达到21.84g/L，转化率达到95.5％。从而大大降低了的底物成本和环境污染等问题，为酪醇的工业化生产和绿色生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN112662658A
公开(公告)日：2021-04-16
申请号：CN202110072132.5
申请日：2021-01-20
Applicant: 江南大学
IPC: C12N11/14 , C12N11/089 , C12N1/21 , C12P7/40 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了固定化重组大肠杆菌利用L‑苯丙氨酸生产L‑苯丙酮酸，属于生物催化技术领域。本发明采用吸附‑交联法，将表达来自奇异变形杆菌的L‑氨基酸脱氨酶PmiLAAD的重组大肠杆菌固定在硅藻土‑聚乙烯亚胺‑戊二醛的复合载体中，经优化后，用于L‑苯丙氨酸生产L‑苯丙酮酸。所得固定化细胞总酶活回收>60％。以固定化的大肠杆菌E.coli细胞做为生物催化剂催化L‑苯丙氨酸生产L‑苯丙酮酸的生物制备，底物浓度100g/L，反应时间16h，转化率在60％以上。将固定化细胞回收利用，重复反应8批，酶活没有明显下降，各批次底物转化率均大于50％。
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公开(公告)号：CN112625995A
公开(公告)日：2021-04-09
申请号：CN202110039525.6
申请日：2021-01-13
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种全细胞催化生产PAPS的方法，属于生物工程技术领域。本发明在ATP硫酸化酶和APS激酶的基础上，引入辅酶PPA和PPK，实现了四种酶在微生物细胞内的同时合成。本发明将源于酿酒酵母的ATP硫化酶基因atps、源于产黄青霉菌的5’‑磷酸腺苷硫酸激酶基因apsk、源于大肠杆菌的无机焦磷酸水解酶酶基因ppa、源于谷氨酸棒状杆菌的多聚磷酸激酶基因ppk，通过不同的载体表达不同的基因，在微生物细胞内的同时合成，得到重组菌。所述重组菌以ATP二钠盐为底物，利用重组菌进行全细胞催化生产PAPS，并通过优化催化条件，催化反应15h后转化率达到96.12％；在反应过程中优化补料条件，催化16h后转化率可达97.8％。
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