一种催化效率提高的丙酮酸脱羧酶突变体及其应用

    公开(公告)号:CN115976002A

    公开(公告)日:2023-04-18

    申请号:CN202211302524.7

    申请日:2022-10-24

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种催化效率提高的丙酮酸脱羧酶突变体及其应用,本发明构建了一种来源于热带假丝酵母的丙酮酸脱羧酶突变体,用于催化生产4‑羟基苯乙醛。本发明突变体的催化半衰期(5.7h)和TTN(24600)较对照分别提高了2.85倍和2.07倍,且突变体表现出较高的脱羧活性。本发明得到的突变体在以4‑羟基苯丙酮酸为底物时,在25℃、pH 6.5的条件下反应12h,4‑羟基苯乙醛的产量可达5.08g/L,底物摩尔转化率达到67.28%。采用本发明的方法,提高了单位催化剂的生产能力和催化剂的反应效率,加快了酶转化法生产4‑羟基苯乙醛的工业化进程。

    一种重组磷脂酶D突变体及其在合成磷脂酰丝氨酸中的应用

    公开(公告)号:CN113637654A

    公开(公告)日:2021-11-12

    申请号:CN202111145733.0

    申请日:2021-09-28

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种重组磷脂酶D突变体及其在合成磷脂酰丝氨酸中的应用,属于生物工程技术领域。本发明先通过构建重组磷脂酶,所述重组磷脂酶是在来源于穗产色链霉菌的磷脂酶的基础上,在PLD的C端去掉信号肽并通过连接肽加上标签MBP获得的,所述重组磷脂酶突变体,是将重组磷脂酶的第379位、第169位、第185位的氨基酸中的一个或多个进行突变得到的。本发明的重组磷脂酶突变体表现出较高的转磷脂酰活性,磷脂酰胆碱的转化率可达85.8%,磷脂酰丝氨酸产率可达72.12%,磷脂酰丝氨酸的产量可以达到57.69g/L。采用本发明的方法,提高了单位催化剂的生产能力和催化剂的反应效率,降低了反应的成本。

    一种高通量筛选α-酮酸高产菌株的方法

    公开(公告)号:CN112626100A

    公开(公告)日:2021-04-09

    申请号:CN202011588760.0

    申请日:2020-12-29

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种高通量筛选α‑酮酸高产菌株方法,属于生物工程技术领域。本发明对来源于奇异变形杆菌的L‑氨基酸脱氨酶PmiLAAD进行蛋白质工程改造,并使用高通量筛选的方法,在96孔板中培养含奇异变形杆菌的L‑氨基酸脱氨酶PmiLAAD的重组菌株及菌株突变体,并进行转接诱导,离心收集含奇异变形杆菌的L‑氨基酸脱氨酶PmiLAAD的细胞来转化L‑氨基酸(L‑缬氨酸、L‑甲硫氨酸及L‑苯丙氨酸)生成其对应的α‑酮酸,并利用2,4‑二硝基苯肼显色后于520nm处读取吸光值,并将吸光值大的菌株进行摇瓶验证,筛选得到α‑酮酸产量显著提高的菌株。

    一种用于酰胺合成的内酰胺酶突变体及其应用

    公开(公告)号:CN118028275A

    公开(公告)日:2024-05-14

    申请号:CN202410129308.X

    申请日:2024-01-30

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明提供了一种用于酰胺合成的内酰胺酶突变体及其应用,属于生物工程技术领域。本发明的内酰胺酶突变体不仅可以催化4‑(羧丙基氨基)‑丁酸内环化反应,而且突变提高了该酶对4‑(羧丙基氨基)‑丁酸的活性,同时也提高了酶的稳定性,最优突变体的酶活可达到100.90U/L,在pH 8.0的条件下孵育60min仍有67.2%的剩余活性,在30℃的条件下孵育60min仍有77.2%的剩余活性,分别相较野生型提高了1.68和1.28倍,为该酶重复利用提供了基础。本发明通过促溶标签与本发明的内酰胺酶突变体共表达,提高了酶的可溶性表达,可使酶活得到提高,为酶法转化法生产ETI‑COOH提供了方法。

    一株谷氨酸棒杆菌及其在产L-赖氨酸中的应用

    公开(公告)号:CN116656566A

    公开(公告)日:2023-08-29

    申请号:CN202310723743.0

    申请日:2023-06-19

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一株谷氨酸棒杆菌及其在产L‑赖氨酸中的应用,属于生物技术领域。本发明通过对谷氨酸棒杆菌的诱变和适应性进化筛选,筛选出能耐受高浓度赖氨酸的L‑赖氨酸产生菌来生产赖氨酸,命名为谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)FMME‑L007,已于2023年05月12日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M 2023742。并对其进行改造,构建了一株重组谷氨酸棒杆菌,经过发酵条件优化,L‑赖氨酸盐酸盐产量达到270.5g/L,相对于葡萄糖的得率为0.72g/g。本发明所得生产菌株潜力大,且发酵生产L‑赖氨酸的方法工艺操作简单易行、培养基成本低廉,提高了赖氨酸葡萄糖得率和生产经济性,适用于工业化生产。

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