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公开(公告)号：CN116064455A
公开(公告)日：2023-05-05
申请号：CN202211496246.3
申请日：2022-11-24
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了催化活力提高的α‑1，2‑岩藻糖基转移酶突变体及其应用，属于基因工程领域。本发明利用基因工程手段，通过建立单双点的饱和突变文库、构建2’‑FL工程菌株对小型突变库进行初筛、合成供体底物GDP‑L‑岩藻糖并对初筛突变体进行复筛。选取高催化活力的单点突变体进行有序叠加，最终筛选得到催化活力、蛋白表达量同时提高的组合突变体。本发明得到的单点和组合突变体对糖基转移酶技术瓶颈的解决具有借鉴意义，为2’‑FL的批量生产提供了有效途径，并为半理性设计和构建新一代2’‑FL微生物细胞工厂提供了新思路。
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公开(公告)号：CN114480240A
公开(公告)日：2022-05-13
申请号：CN202210184191.6
申请日：2022-02-22
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/70 , C12N15/53 , C12N15/54 , C12N15/56 , C12N15/57 , C12N15/60 , C12N15/61 , C12P19/00 , C12R1/19
Abstract: 本发明涉及一种产岩藻糖基乳糖的基因工程菌及生产方法，属于代谢工程和食品发酵技术。本发明利用合成生物学手段，基于从头合成途径构建岩藻糖基乳糖的大肠杆菌细胞工厂，采用CRISPR/Cas9基因编辑技术对宿主细胞中的旁路相关基因lacZ、wcaJ、nudD、pfkA、lon进行敲除，通过多质粒表达系统进行基因manB、manC、gmd和wcaG的组装，构建不同拷贝数的表达载体以增加关键基因的表达水平；并筛选不同来源的岩藻糖基转移酶提高限速酶的活力。构建得到的重组大肠杆菌可以利用甘油合成2’‑岩藻糖基乳糖和3‑岩藻糖基乳糖，遗传稳定，表达水平高，具有明显的工业化生产潜力。
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公开(公告)号：CN113684163A
公开(公告)日：2021-11-23
申请号：CN202110891714.6
申请日：2021-08-04
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种提高乳酰‑N‑四糖产量的基因工程菌及其生产方法，属于代谢工程和食品发酵技术领域。本发明通过lgtA和wbgO的外源表达，组合调控乳酰‑N‑四糖合成途径中galE，galT和galK的表达并敲除大肠杆菌宿主乳酰‑N‑四糖合成途径中的lacZ表达，以及对发酵培养基的半乳糖和IPTG添加量进行优化，从而达到提高乳酰‑N‑四糖产量的目的，在摇瓶实验中，大肠杆菌生产乳酰‑N‑四糖的能力由0.22g/L提升至4.00g/L，在3L发酵罐中，乳酰‑N‑四糖的产量达到19.80g/L，为乳酰‑N‑四糖的工业化生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN112342176A
公开(公告)日：2021-02-09
申请号：CN202011102427.4
申请日：2020-10-15
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/70 , C12N9/90 , C12N9/38 , C12N9/12 , C12N9/10 , C12N9/04 , C12P19/00 , C12R1/19
Abstract: 本发明涉及产2’‑岩藻糖基乳糖的基因工程菌及其应用，属于代谢工程和食品发酵技术。本发明通过改变大肠杆菌中转录调控因子的表达来调控代谢路径中的磷酸甘露糖变位酶，甘露糖‑1‑磷酸鸟嘌呤基转移酶、GDP‑甘露糖‑6‑脱氢酶、GDP‑岩藻糖合成酶、α‑1,2‑岩藻糖基转移酶和乳糖通透酶的表达水平，以获得最佳质粒组合；通过CRISPR‑Cas9基因编辑系统敲除大肠杆菌合成途径中的β‑半乳糖苷酶和UDP‑葡萄糖脂质载体转移酶，以提高2’‑岩藻糖基乳糖的累积量；本发明得到的重组大肠杆菌可以利用甘油或葡萄糖合成2’‑岩藻糖基乳糖，遗传稳定，表达水平高，具有明显的工业化生产潜力。
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