公开(公告)号：CN118389388A

公开(公告)日：2024-07-26

申请号：CN202410574982.9

申请日：2024-05-10

Applicant: 江南大学

Inventor： 张涛 ,  李晨晨 ,  李梦丽

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/54 ,  C12N15/56 ,  C12N15/60 ,  C12N15/61 ,  C12N15/70 ,  C12P19/26 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种生产唾液酸乳糖‑N‑新四糖的基因工程菌，属于微生物基因工程领域。本发明通过表达β‑1,3‑N‑乙酰葡糖胺基转移酶基因lgtA、β‑1,4‑半乳糖基转移酶基因lgtB、CMP‑唾液酸合成酶基因neuA、唾液酸乳糖转移酶基因bst*，形成了LST c的代谢通路；并通过模块组合策略，利用质粒拷贝数微调转录水平；通过敲除LST c代谢途径的旁支途径编码基因，优化前体UDP‑GlcNAc和UDP‑Gal模块的供给平衡，形成CTP辅因子再生系统，达到提高LST c产量的目的。最终获得一株LST c生产菌株，摇瓶产量为220.9mg/L，3‑L发酵罐产量达到922.2mg/L。

公开(公告)号：CN114806991B

公开(公告)日：2023-08-25

申请号：CN202210530585.2

申请日：2022-05-16

Applicant: 江南大学

Inventor： 张涛 ,  李梦丽 ,  江波 ,  李晨晨

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/53 ,  C12N15/54 ,  C12N15/56 ,  C12N15/61 ,  C12P19/00 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种提高岩藻糖基乳糖产量的工程大肠杆菌及生产方法，属于基因工程技术领域。本发明利用合成生物学手段，在大肠杆菌BL21(DE3)ΔlacZΔwcaJΔnudDΔpfkAΔlon宿主菌中组合调控HpfutC/HpM32的转录和翻译水平，通过改变转录水平的控制元件(启动子)，翻译水平的控制元件(RBS)，融合标签以及基因拷贝数来提高α‑1，2/3‑岩藻糖基转移酶的催化活力和可溶性表达。构建得到的重组大肠杆菌实现了2’‑岩藻糖基乳糖和3‑岩藻糖基乳糖的高效合成，菌株遗传稳定，转化率高，具有明显的工业化生产潜力。

公开(公告)号：CN114806991A

公开(公告)日：2022-07-29

申请号：CN202210530585.2

申请日：2022-05-16

Applicant: 江南大学

Inventor： 张涛 ,  李梦丽 ,  江波 ,  李晨晨

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/53 ,  C12N15/54 ,  C12N15/56 ,  C12N15/61 ,  C12P19/00 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种提高岩藻糖基乳糖产量的工程大肠杆菌及生产方法，属于基因工程技术领域。本发明利用合成生物学手段，在大肠杆菌BL21(DE3)ΔlacZΔwcaJΔnudDΔpfkAΔlon宿主菌中组合调控HpfutC/HpM32的转录和翻译水平，通过改变转录水平的控制元件(启动子)，翻译水平的控制元件(RBS)，融合标签以及基因拷贝数来提高α‑1，2/3‑岩藻糖基转移酶的催化活力和可溶性表达。构建得到的重组大肠杆菌实现了2’‑岩藻糖基乳糖和3‑岩藻糖基乳糖的高效合成，菌株遗传稳定，转化率高，具有明显的工业化生产潜力。

公开(公告)号：CN114480240B

公开(公告)日：2024-03-26

申请号：CN202210184191.6

申请日：2022-02-22

Applicant: 江南大学

Inventor： 张涛 ,  李梦丽 ,  江波 ,  李晨晨 ,  胡苗苗

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/53 ,  C12N15/54 ,  C12N15/56 ,  C12N15/57 ,  C12N15/60 ,  C12N15/61 ,  C12P19/00 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一种产岩藻糖基乳糖的基因工程菌及生产方法，属于代谢工程和食品发酵技术。本发明利用合成生物学手段，基于从头合成途径构建岩藻糖基乳糖的大肠杆菌细胞工厂，采用CRISPR/Cas9基因编辑技术对宿主细胞中的旁路相关基因lacZ、wcaJ、nudD、pfkA、lon进行敲除，通过多质粒表达系统进行基因manB、manC、gmd和wcaG的组装，构建不同拷贝数的表达载体以增加关键基因的表达水平；并筛选不同来源的岩藻糖基转移酶提高限速酶的活力。构建得到的重组大肠杆菌可以利用甘油合成2’‑岩藻糖基乳糖和3‑岩藻糖基乳糖，遗传稳定，表达水平高，具有明显的工业化生产潜力。

公开(公告)号：CN117143790A

公开(公告)日：2023-12-01

申请号：CN202311038491.4

申请日：2023-08-17

Applicant: 江南大学

Inventor： 张涛 ,  胡苗苗 ,  江波 ,  李晨晨 ,  李梦丽

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/55 ,  C12N15/61 ,  C12N15/54 ,  C12P19/26 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种合成乳酰‑N‑三糖的重组益生菌的构建及其应用，属于生物技术和食品发酵工程领域。本发明优化启动子和质粒拷贝数调控乳酰‑N‑三糖合成途径中的关键基因lgtA的表达，敲除宿主中防御外源DNA入侵的非特异性的核酸内切酶基因endA和乳酰‑N‑三糖合成途径中的旁支代谢基因wecB。本发明为代谢工程改造大肠杆菌Nissle1917生产乳酰‑N‑三糖奠定了基础，乳酰‑N‑三糖产量达到2040mg/L，也为益生菌应用于母乳低聚糖的生物合成提供了新思路和方法借鉴。本发明提供构建的重组大肠杆菌Nissle1917的方法提高了菌株的基因编辑效率，该方法的有益效果不仅仅限于目前的菌株和目前的产物。

公开(公告)号：CN116478894A

公开(公告)日：2023-07-25

申请号：CN202310277210.4

申请日：2023-03-21

Applicant: 江南大学

Inventor： 张涛 ,  李晨晨 ,  李梦丽

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/54 ,  C12N15/55 ,  C12N15/60 ,  C12N15/61 ,  C12N15/56 ,  C12P19/26 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种提高唾液酸乳糖产量的基因工程菌及其生产方法，属于生物技术和食品发酵工程领域。本发明通过对基因neuB，neuC，neuA，lacY，lst和/或pst6‑224的表达，从而构建得到唾液酸乳糖的从头合成路径，通过模块化代谢工程平衡代谢通路、增加前体物质UDP‑乙酰葡糖胺相关合成基因的表达、构建谷氨酰胺循环体系、敲除大肠杆菌基因组唾液酸乳糖合成途径中旁支路径的lacZ、nanA、pfkA和nagB表达，以及筛选不同来源的α‑2,3(6)唾液酸转移酶，成功获得高效合成唾液酸乳糖的生产菌株，在发酵培养实验中，3'‑SL和6'‑SL的产量分别达到6.46g/L、4.07g/L。

公开(公告)号：CN117487729A

公开(公告)日：2024-02-02

申请号：CN202311355000.9

申请日：2023-10-18

Applicant: 江南大学

Inventor： 张涛 ,  李晨晨 ,  李梦丽

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/52 ,  C12N15/54 ,  C12N15/56 ,  C12N15/60 ,  C12N15/61 ,  C12N15/62 ,  C12N15/70 ,  C12P19/60 ,  C12P19/26 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种生产唾液酸乳糖的基因工程菌及其应用，属于微生物基因工程领域。本发明通过对基因的过表达，从而构建得到唾液酸乳糖的代谢合成路径，通过增加前体物质UDP‑乙酰葡糖胺相关合成基因的表达、构建谷氨酰胺循环体系、沉默大肠杆菌基因组唾液酸乳糖合成途径中旁支路径的表达，以及通过调控启动子强度和筛选融合蛋白表达标签来提高唾液酸转移酶表达水平，成功获得高效合成唾液酸乳糖的生产菌株，在摇瓶发酵培养实验中，3'‑SL和6'‑SL的产量分别达到8.09g/L、4.67g/L；在3L发酵罐中，3'‑SL和6'‑SL的产量分别达到44.23g/L和36.29g/L。

公开(公告)号：CN117343888A

公开(公告)日：2024-01-05

申请号：CN202311215865.5

申请日：2023-09-20

Applicant: 江南大学

Inventor： 张涛 ,  李梦丽 ,  杨思佳 ,  江波 ,  李晨晨

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/56 ,  C12N15/57 ,  C12N15/54 ,  C12N15/53 ,  C12N15/61 ,  C12N9/38 ,  C12N9/50 ,  C12N9/12 ,  C12N9/10 ,  C12N9/02 ,  C12N9/24 ,  C12N9/90 ,  C12N9/04 ,  C12N15/70 ,  C12P19/18 ,  C12P19/00 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种高效合成乳糖‑N‑二岩藻四糖的基因工程菌及生产方法，属于基因工程技术领域。本发明利用合成生物学手段，在宿主菌中组合调控了GDP‑L‑岩藻糖合成途径中的manB、manC、gmd和wcaG，并在此基础上异源表达了限速酶α‑1,2‑岩藻糖基转移酶突变体和α‑1,3‑岩藻糖基转移酶突变体。基于质粒拷贝数模块优化通路基因，通过限速酶的表达上调(酶源筛选、截短/延伸突变、定点突变、插入位点模式优化、染色体整合)获得了从头高效生产乳糖‑N‑二岩藻四糖的基因工程菌株，菌株生产成本低廉且产物生产水平较高，具有明显的工业化生产潜力。

公开(公告)号：CN116064455A

公开(公告)日：2023-05-05

申请号：CN202211496246.3

申请日：2022-11-24

Applicant: 江南大学

Inventor： 张涛 ,  李梦丽 ,  江波 ,  李晨晨

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N15/61 ,  C12N15/53 ,  C12N1/21 ,  C12P19/00 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了催化活力提高的α‑1，2‑岩藻糖基转移酶突变体及其应用，属于基因工程领域。本发明利用基因工程手段，通过建立单双点的饱和突变文库、构建2’‑FL工程菌株对小型突变库进行初筛、合成供体底物GDP‑L‑岩藻糖并对初筛突变体进行复筛。选取高催化活力的单点突变体进行有序叠加，最终筛选得到催化活力、蛋白表达量同时提高的组合突变体。本发明得到的单点和组合突变体对糖基转移酶技术瓶颈的解决具有借鉴意义，为2’‑FL的批量生产提供了有效途径，并为半理性设计和构建新一代2’‑FL微生物细胞工厂提供了新思路。

公开(公告)号：CN114480240A

公开(公告)日：2022-05-13

申请号：CN202210184191.6

申请日：2022-02-22

Applicant: 江南大学

Inventor： 张涛 ,  李梦丽 ,  江波 ,  李晨晨 ,  胡苗苗

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/53 ,  C12N15/54 ,  C12N15/56 ,  C12N15/57 ,  C12N15/60 ,  C12N15/61 ,  C12P19/00 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一种产岩藻糖基乳糖的基因工程菌及生产方法，属于代谢工程和食品发酵技术。本发明利用合成生物学手段，基于从头合成途径构建岩藻糖基乳糖的大肠杆菌细胞工厂，采用CRISPR/Cas9基因编辑技术对宿主细胞中的旁路相关基因lacZ、wcaJ、nudD、pfkA、lon进行敲除，通过多质粒表达系统进行基因manB、manC、gmd和wcaG的组装，构建不同拷贝数的表达载体以增加关键基因的表达水平；并筛选不同来源的岩藻糖基转移酶提高限速酶的活力。构建得到的重组大肠杆菌可以利用甘油合成2’‑岩藻糖基乳糖和3‑岩藻糖基乳糖，遗传稳定，表达水平高，具有明显的工业化生产潜力。