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公开(公告)号：CN116103213A
公开(公告)日：2023-05-12
申请号：CN202310047372.9
申请日：2023-01-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种代谢工程改造大肠杆菌生产富马酸的方法，属于发酵领域。本发明在大肠杆菌E.coliFMME‑N‑5中敲除富马酸酶基因、富马酸还原酶基因、天冬氨酸酶基因和乳酸脱氢酶基因，并过表达磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因和琥珀酸脱氢酶编码基因。所得菌株E.coliFMME‑N‑5(△fumB△frdBC△aspA△ldhA)‑ppc‑sdhCDAB用于发酵生产富马酸，在7.5L发酵罐上发酵65h，富马酸产量达到45g/L，生产强度为0.69g/L/h，富马酸对葡萄糖得率为0.52g/g，副产物甲酸不积累，琥珀酸、乳酸、乙酸积累量均低于1g/L，具有一定的工业生产潜力。
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公开(公告)号：CN116064348A
公开(公告)日：2023-05-05
申请号：CN202211116758.2
申请日：2022-09-14
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高效生产D‑丹参素的重组大肠杆菌及其构建方法与应用，本发明通过改变质粒拷贝数和RBS的强度精细化调控D‑丹参素的路径酶L‑氨基酸脱氨酶LAAD、苯丙酮酸还原酶LaPPR和葡萄糖脱氢酶GDH表达水平，实现了该级联路径反应平衡；最优重组菌株E.coli13(含有质粒pRSF‑LAAD‑LaPPR，PCDF‑GDH)5L发酵罐下采用分批补料策略(共流加60g/L L‑多巴)，转化16h，D‑丹参素产量达到58.86g/L，转化率为97.6％。本发明方法在工业上用于提高D‑丹参素的产量具有极大的潜力和广泛的价值。
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公开(公告)号：CN115960854A
公开(公告)日：2023-04-14
申请号：CN202211501911.3
申请日：2022-11-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种大肠杆菌腐胺转氨酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明通过将大肠杆菌来源的腐胺转氨酶PaTA将第91位苯丙氨酸突变为酪氨酸，克服了野生型的酶催化稳定性低的局限，获得的突变体F91Y比酶活达2.56U/mg。表达突变体F91Y的重组菌以10g/L 1,4‑环己烷二甲醛为底物，转化率达50.48％。在1,4‑环己烷二甲胺制备中具有高生产强度，高催化稳定性，减少了转化中的投菌量，极大节约了工业化的生产成本。
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公开(公告)号：CN115838696A
公开(公告)日：2023-03-24
申请号：CN202211084151.0
申请日：2022-09-06
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种普雷沃氏菌内消旋—二氨基庚二酸脱氢酶突变体及其应用，本发明的改造方法通过组合突变设计出最佳突变体，对PtDAPDH的蛋白质进行改造，克服了之前野生型酶催化活性低的局限，最终得到最佳突变体T5(PtDAPDHN13E/S90R/P254A)，其催化半衰期和D‑对羟基苯甘氨酸产量分别为野生型的1.10倍和2.67倍，以L‑对羟基苯甘氨酸为底物，转化后0.1L摇瓶产量为3.2g/L，转化率为32％，高催化效率和生产强度，大大降低了之前的高菌体量以及昂贵的底物成本，为D‑对羟基苯甘氨酸的工业化生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN112410385B
公开(公告)日：2022-07-22
申请号：CN202011329678.6
申请日：2020-11-24
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种细胞色素P450环氧酶及其应用，属于生物工程技术领域。本发明提供了一种细胞色素P450环氧酶CytP，通过在大肠杆菌中表达所述环氧酶CytP，利用全细胞转化法，将降冰片烯转化为环氧降冰片烷。并从反应的pH、温度、相比和诱导时间等因素对CytP酶的两相催化体系进行优化，克服了之前P450单加氧酶环氧化活性低且催化特异性差的局限，可使得环氧降冰片烷产量达到36.81g/L，催化特性达到99％，环氧化反应摩尔产率达31.46％。从而大大降低了之前的底物成本和环境污染等问题，为环氧降冰片烷的工业化生产和绿色生产奠定了基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110951660B
公开(公告)日：2021-12-03
申请号：CN201911317890.8
申请日：2019-12-19
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一株固定CO2产苹果酸的大肠杆菌工程菌的构建及应用，属于发酵领域。所述工程菌是对大肠杆菌Escherichia coli MG1655进行基因工程改造获得的菌；所述基因工程改造为敲除富马酸还原酶基因、富马酸酶基因、乳酸脱氢酶基因和乙醇脱氢酶基因，并游离过表达甲酸脱氢酶、乙酰辅酶A合成酶、酰化乙醛脱氢酶、甲醛裂合酶、二羟基丙酮激酶、苹果酸酶和亚磷酸氧化还原酶，获得菌株GH0407。上述菌株用于发酵生产苹果酸，以CO2和葡萄糖作为共底物厌氧发酵72h，苹果酸产量达到39g/L，得率为1.53mol/mol，原始出发菌株不积累苹果酸。
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公开(公告)号：CN112921012A
公开(公告)日：2021-06-08
申请号：CN202110291856.9
申请日：2021-03-18
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了谷氨酸棒杆菌meso‑2,6‑二氨基庚二酸脱氢酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明通过结合定点饱和突变、组合突变以及迭代饱和突变对CgDAPDH的蛋白质进行改造，克服了亲本酶因为氢原子转移距离较长而导致的催化活性低的局限，获得的突变体CgDAPDHBC621/D120S/W144S/I169P比酶活和kcat/Km值分别为亲本酶的38和120倍。将CgDAPDHBC621/D120S/W144S/I169P与PmL‑AAD、SambHmaS和PaMDH偶联后，以L‑酪氨酸为底物，D‑HPG产量达到6.33g/L，为D‑HPG的工业化生产提供了潜在的生产方法。
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公开(公告)号：CN110982771B
公开(公告)日：2021-05-28
申请号：CN201911367276.2
申请日：2019-12-26
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种合成对羟基扁桃酸的方法，属于生物工程技术领域。本发明通过分子生物学手段构建了一株双质粒重组菌，共表达丙酮酸脱羧酶、苯乙醛脱氢酶和NADH氧化酶基因，将构建好的表达质粒导入E.coli BL21(DE3)。将对羟基苯甲醛和乙醛酸转化为对羟基扁桃酸，并通过NADH氧化酶辅酶再生系统，通过将NADH转化为NAD+，使得NAD+循环再生，转化能够高效进行。并通过优化底物浓度及比例，优化转化温度和pH，实现了对羟基扁桃酸的高效生产。在30℃、pH7的条件下反应24h，可将30mM的底物对羟基苯甲醛转化为28.5mM的对羟基扁桃酸，转化率可达到95％。
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公开(公告)号：CN112680485A
公开(公告)日：2021-04-20
申请号：CN202110072127.4
申请日：2021-01-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了固定化重组大肠杆菌将L‑缬氨酸转化为α‑酮缬氨酸的方法，属于生物工程技术领域。本发明将能够表达L‑氨基酸脱氨酶的基因工程菌包埋在纳米四氧化三铁‑聚乙烯醇‑海藻酸钠复合载体中，将固定化细胞用于L‑缬氨酸转化为α‑酮缬氨酸。所得固定化细胞稳定性好，连续使用8批次后，仍具有较高的活力，对底物的利用率高，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN109777788B
公开(公告)日：2020-12-01
申请号：CN201910207909.7
申请日：2019-03-19
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种亮氨酸脱氢酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明在SEQ ID NO.1所示的亮氨酸脱氢酶氨基酸序列的基础上，将第47位的氨基酸残基M突变为V，且将第109位的氨基酸残基N突变为I，得到了一种亮氨酸脱氢酶突变体(突变点为M47V，N109I)，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，表达该突变体的重组菌E.coli BL21‑pET28a‑BtLDH007单位菌体的亮氨酸脱氢酶酶活达到170.9U/g；以2‑酮丁酸为底物生产L‑2‑氨基丁酸的产量最高达到77.6g/L，转化率为96.0％。
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