一种基于RPA-CRISPR-Cas12a系统快速检测转基因产品的试剂盒及方法

    公开(公告)号:CN115992284A

    公开(公告)日:2023-04-21

    申请号:CN202211129638.6

    申请日:2022-09-16

    Abstract: 本发明公开了一种基于RPA‑CRISPR‑Cas12a系统快速检测转基因产品的试剂盒及方法,所述试剂盒包含Cry1Ab/Ac基因或CP4‑EPSPS基因的RPA引物及crRNA引导序列;检测时通过先对转基因的待测样品进行RPA扩增,再在CrRNA序列介导下,引导CRISPR‑Cas12a检测体系对RPA扩增产物进行的超灵敏识别目标dsDNA,形成三元复合物,进而激活附属切割功能,任意切割体系中的标记荧光探针的ssDNA,最后通过裂解产物中的荧光显色检测进行判断。本发明通过RPA扩增及CrRNA识别可超灵敏识别转基因产品中的Cry1Ab/Ac基因和CP4‑EPSPS基因,检测方法特异性强,且在灵敏度上可低至45拷贝/μL,可以实现现场的快速和高通量的检测。

    一种利用DNA改组提高大肠杆菌工程菌产核黄素能力的方法

    公开(公告)号:CN114181963A

    公开(公告)日:2022-03-15

    申请号:CN202111482246.3

    申请日:2021-12-07

    Abstract: 本发明提供了一种利用DNA改组提高大肠杆菌工程菌产核黄素能力的方法,涉及基因工程领域,包括如下步骤:构建含26个基因的产核黄素的大肠杆菌工程菌;T7RNA聚合酶基因表达单元DNA重排和定向筛选,抽提获得第一批阳性质粒;核黄素生物合成和转运系统的DNA重排和定向筛选,抽提获得第二批阳性质粒;大肠杆菌σ因子基因的DNA重排和定向筛选,抽提获得第三批阳性质粒;将第三批质粒导入到不同底盘细胞获得重组菌株;选取核黄素产量最高的阳性菌株。有效消除产核黄素的大肠杆菌工程菌构建过程中T7RNAP对大肠杆菌宿主的毒性问题、产物的反馈抑制问题以及构建的核黄素生物合成基因的适度和协调表达问题。进一步提高大肠杆菌工程菌株生物合成核黄素的效率和产量。

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