公开(公告)号：CN105941155A

公开(公告)日：2016-09-21

申请号：CN201610373521.0

申请日：2016-05-31

Applicant: 东北林业大学 ,  齐凤慧 ,  詹亚光

Inventor： 齐凤慧 ,  詹亚光 ,  景天忠 ,  陈思齐 ,  崔丽婷 ,  曾凡锁 ,  由香玲 ,  范桂枝

IPC: A01H4/00

CPC classification number: A01H4/008

Abstract: 本发明公开了一种利用悬浮培养技术快速繁殖水曲柳的方法，选取水曲柳种子，用酒精溶液浸泡，无菌水冲洗，放入次氯酸钠溶液中消毒，之后再用无菌水冲洗，取出成熟胚接种于种子萌发培养基中培养，7‑10d后转入液体增殖培养基中进行培养15‑20天，将侧芽切下，继续转入液体增殖培养基中培养，将健壮的苗驯化一周后移栽入灭菌处理的基质中直至幼苗成活。本发明的优点在于用悬浮培养法诱导水曲柳快繁实用技术方法简便，打破了由于种子发芽率低而造成的生产瓶颈，缩短培养周期，提高了繁殖系数，减少了组培实验过程中过多的人力和物力的消耗，从根本上提高了工作效率，节约了生产成本，并能达到工厂化育苗的目的。

公开(公告)号：CN101824459B

公开(公告)日：2015-05-20

申请号：CN200910073487.5

申请日：2009-12-23

Applicant: 东北林业大学 ,  詹亚光 ,  范桂枝

Inventor： 詹亚光 ,  范桂枝 ,  翟俏丽 ,  李晓灿 ,  齐凤慧 ,  曾凡锁 ,  由香玲

IPC: C12P33/00 ,  C12P1/00 ,  C12N1/14 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明提供了一种利用内生真菌诱导子促进白桦(Betula platyphylla Suk.)悬浮细胞中三萜积累的方法。该方法利用从白桦树皮中分离出的内生真菌，将其制备成真菌诱导子，在白桦悬浮细胞生长的适宜阶段，加入适宜浓度的真菌诱导子，在诱导一定时间后收获细胞，筛选出了有效提高三萜积累的内生真菌菌种，为拟茎点霉属(Phomopsis sp.)。在此基础上，进一步优化了该菌种制备的多糖诱导子和蛋白诱导子的诱导效果，发现在白桦细胞培养的第8d，加入40μg/ml的多糖诱导子，诱导1d后可使细胞中三萜含量高达29.47mg/g，为对照组的1.78倍；在白桦悬浮细胞培养的第8d加入浓度为80μg/ml的真菌蛋白诱导子，诱导培养4d，细胞中的三萜含量达到34.49mg/g，为对照组的2.47倍。本发明通过确定添加诱导子的种类、添加浓度、适宜添加诱导子的白桦悬浮细胞的生长阶段和诱导子的诱导时间，建立了有效提高白桦悬浮细胞中三萜积累的诱导技术，为利用细胞工程技术工业化生产白桦三萜奠定重要的理论和技术基础，因此本研究具有广阔的应用潜力和推广前景。

公开(公告)号：CN110157729A

公开(公告)日：2019-08-23

申请号：CN201910424172.4

申请日：2019-05-21

Applicant: 东北林业大学

Inventor： 范桂枝 ,  姜黎 ,  张李香 ,  詹亚光 ,  王海燕

IPC: C12N15/82 ,  A01H1/06 ,  A01H4/00 ,  A01H6/08 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明是一种利用Ar.1193菌株获得高产黄酮的罗布麻毛状根诱导方法，它属于生物工程领域。其特征在于：(1)Ar.1193菌株对罗布麻无菌苗茎段的遗传转化效率为69.17％；(2)在一个培养周期(23d)内，毛状根生长量增殖近9倍；(3)一个培养周期后收获毛状根中的总黄酮含量达63.28mg/g，是大田收获罗布麻植株根部含量的7倍。本发明提供一种遗传转化率高、生长速度快和黄酮含量高的罗布麻毛状根遗传转化体系建立方法。

公开(公告)号：CN104087644B

公开(公告)日：2018-04-27

申请号：CN201410270442.8

申请日：2014-06-18

Applicant: 东北林业大学 ,  曾凡锁 ,  姜涛

Inventor： 曾凡锁 ,  姜涛 ,  詹亚光 ,  辛颖 ,  孙丰坤 ,  齐凤慧 ,  范桂枝 ,  由香玲 ,  尹静

IPC: C12P33/00

Abstract: 本发明属于生物工程领域，具体涉及一种利用氢气提高白桦细胞中总三萜和白桦脂醇含量的方法。以白桦悬浮细胞为材料，按50g/L接种量接种于100mL B5液体培养基中，附加0.1～0.3mg/L6‑BA和0.5～4.0mg/L TDZ，蔗糖20g/L，酸水解酪蛋白1g/L，pH5.5～6.0。在细胞悬浮培养第8天通入氢气使其终浓度为0.5‑1.5mmol/L，培养12h后收获，白桦脂醇含量最高为1.11mg/gDW，是对照组185.1％。培养24h后收获，细胞内总三萜含量达到24.37mg/gDW，为对照组的181.32％。氢气具有无毒无害的优势，方便代谢产物的分离和纯化。该发明为解决天然植物药物来源紧缺和工业化大规模生产白桦三萜和白桦脂醇药物提供了一种新途径。

公开(公告)号：CN103430849B

公开(公告)日：2015-08-26

申请号：CN201310372994.5

申请日：2013-08-24

Applicant: 东北林业大学 ,  詹亚光 ,  尹静

Inventor： 詹亚光 ,  尹静 ,  赵微 ,  肖佳雷 ,  由香玲 ,  曾凡锁 ,  范桂枝

IPC: A01H4/00

Abstract: 本发明属于生物工程领域，具体涉及一种利用温度处理提高白桦丛生苗中总三萜、齐墩果酸和黄酮含量的方法。以白桦愈伤组织接种于NT+2mg/L 6-BA的固体培养基诱导白桦丛生苗，继代两次后转移至NT+0.5mg/L 6-BA固体培养基，筛选获得总三萜含量高的白桦丛生苗。将上述筛选丛生苗接种于NT+0.5mg/L 6-BA液体培养基中，接种量为5g/100ml，震荡培养第七天分别进行高温45℃和低温4℃胁迫处理，此后24h-48h收获，检测丛生苗中总三萜、总黄酮和齐墩果酸含量。两种温度胁迫处理总三萜含量比对照提高49.20％～5.03倍，最高含量达59.66mg/g；齐墩果酸含量比对照提高3.68倍～10.56倍，最高含量达2.33mg/g；总黄酮含量对照提高10％～38.37％，最高达4.0mg/g。该申请发明无污染、低成本、可操作性强，效率高，为解决天然植物药物来源紧缺和工业化大规模生产白桦总三萜和齐墩果酸药物提供了一种新技术。

公开(公告)号：CN102893858A

公开(公告)日：2013-01-30

申请号：CN201110214552.9

申请日：2011-07-29

Applicant: 东北林业大学 ,  由香玲 ,  曲冠证

Inventor： 由香玲 ,  曲冠证 ,  詹亚光 ,  代金玲 ,  陶雷 ,  谭啸 ,  尹静 ,  范桂枝 ,  曾繁琐 ,  齐凤慧

IPC: A01H4/00

Abstract: 一种通过培养龙牙楤木体细胞胚生产有用次生代谢物质的方法，其特征是：1)从无菌实生苗根段获得的胚性愈伤组织分别在分化培养条件和增殖培养条件下进行摇瓶悬浮培养；2)根据体细胞胚不同发育状况定期取材，并计算它们的生物生长量；3)分析体细胞胚各发育时期材料中楤木总皂苷、齐墩果酸、总黄酮的累积；4)体细胞胚苗中各成分含量最高，总皂苷占栽培植株根中含量的29.7％；齐墩果酸占栽培植株根中含量的29.9％；总黄酮占栽培植株叶中含量的42.8％，且体细胞胚苗中三种物质累积效率最高，分别为：总皂苷6.72mg/周、齐墩果酸3.42mg/周、总黄酮7.36mg/周。

公开(公告)号：CN101475929A

公开(公告)日：2009-07-08

申请号：CN200910071296.5

申请日：2009-01-19

Applicant: 东北林业大学 ,  詹亚光

Inventor： 詹亚光 ,  范桂枝 ,  尹静 ,  王博 ,  由香玲 ,  齐凤慧 ,  曾凡锁

IPC: C12N5/04 ,  C12P7/40

Abstract: 一种利用白桦悬浮培养生产齐墩果酸的方法。该方法是以白桦成树一年生枝休眠芽、展叶芽和种子为材料，接种于WPM+6－BA 1mg/L培养基中获得白桦无菌苗，再以无菌苗茎段和叶片为外植体，在培养基IS上诱导获得稳定、快速生长的愈伤组织，最后在B5培养基，激素为0.1～0.4mg/L6－BA和0.01～0.1mg/L TDZ的培养基中进行悬浮细胞系的培养，蔗糖为20g/L，pH值为6.0～6.5，接种量鲜重为30～50g/L。23～25℃，110～130转/min，光照8～10h/d，光照强度1400～1700Lx，15天继代1次，多次继代培养后获得稳定的白桦悬浮培养细胞系。经高效液相色谱法检测，获得的白桦恳浮培养细胞中齐墩果酸含量可达到0.217～0.714mg/g(干重)。本发明是第一次在白桦植物中通过细胞工程方法生产齐墩果酸，此方法周期短，成本低，能节省大量人力、物力、提高劳动生产率，为解决天然植物药物来源紧缺和工业化大规模生产齐墩果酸药物提供了一种新途径。

公开(公告)号：CN101210231A

公开(公告)日：2008-07-02

申请号：CN200710144877.8

申请日：2007-12-20

Applicant: 东北林业大学 ,  詹亚光 ,  齐凤慧

Inventor： 詹亚光 ,  董杰 ,  齐凤慧 ,  曾凡锁 ,  范桂枝 ,  由香玲 ,  李淑娟

IPC: C12N5/04 ,  C12P7/42

Abstract: 本发明提供了一种生产没食子酸的茶条槭悬浮培养细胞。其特征在于将适量的茶条槭愈伤组织接种于WPM+TDZ0.002－0.01mg/L+6－BA0.05－0.15mg/L固体培养基中继代培养，15－20天1继代。选择长势好的愈伤组织转入3倍的大量元素WPM液体培养基中，激素为TDZ0.002－0.010mg/L和6－BA0.05－0.15mg/L，蔗糖为2－3％，pH值为5.8－6.0，接种量鲜重为20－40g/L。23－25℃，110－130转/min，光照8－10h/d，光照强度1400－1700Lx，7－15天1继代，20－30天为一周期，1个周期后收集细胞。鲜重达478.2g/L，干重可达22.3g/L，没食子酸含量达2.29％，没食子酸产量0.51g/L，一年可收获6.1227g/L。本发明是第一次在茶条槭植物中能通过细胞工程方法高产没食子酸的悬浮细胞。解决了没食子酸生产上的原料问题，易操作，周期短，成本低，能节省大量人力、物力、提高劳动生产率，进而保护环境，保护茶条槭植物资源。

公开(公告)号：CN118160532A

公开(公告)日：2024-06-11

申请号：CN202410458343.6

申请日：2024-04-17

Applicant: 东北林业大学

Inventor： 詹亚光 ,  刘建飞 ,  尹静 ,  范桂枝 ,  曾凡锁 ,  齐凤慧 ,  何利明 ,  由香玲

IPC: A01G7/06 ,  A01G17/00

Abstract: 本发明涉及一种基于截干因素选择提高水曲柳穗条产量的方法，属于林木生物技术领域。包括如下步骤：(1)截干树龄选择；(2)截干高度选择；(3)截干时间选择。确定截干因素的参数为：≥4年生幼树，于春季树液流动后3周左右进行30～50cm截干处理。该方法对水曲柳采穗圃营建、无性繁殖利用具有重要意义，并为林木资源快速繁育和其它珍贵树种采穗圃营建奠定技术支撑和参考。

公开(公告)号：CN114591882A

公开(公告)日：2022-06-07

申请号：CN202210201087.3

申请日：2022-03-03

Applicant: 东北林业大学

Inventor： 范桂枝 ,  高兴蕾 ,  王滋涵 ,  由香玲 ,  詹亚光

IPC: C12N5/04 ,  C12N15/82 ,  C12N5/10 ,  C12N15/12

Abstract: 本发明是一种利用酶解法获得刺五加愈伤组织单细胞，并对其进行农杆菌转化获得转GFP基因的方法，它属于生物技术领域。采用1.5％纤维素酶R‑10和0.2％离析酶R‑10酶解刺五加愈伤组织6h后400×g离心5min时，单细胞产量最大、活力最强，分别为1.88×106个·g‑1和90％。40％PEG浓度下农杆菌转化单细胞40min时，单细胞瞬时转化效率达30.34％。本发明提供了一种高产刺五加单细胞的酶解体系，同时获得了一致的转GFP基因的单细胞，该发明将为从单细胞水平研究基因的功能，为基因在不同种类细胞中的功能分析提供技术支撑。