公开(公告)号：CN111004816A

公开(公告)日：2020-04-14

申请号：CN201911194844.3

申请日：2019-11-28

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 吴森 ,  杜旭光 ,  李攀 ,  张丽君 ,  李智方 ,  胥春龙

IPC: C12N15/79 ,  C12N15/90 ,  C12N15/65

Abstract: 本发明提供一种基于Cas12a技术的外源基因定点敲入方法。利用Cas12a设计一种依赖微同源臂的外源基因精确定点整合的方法(简称MITI)，该方法通过简单的PCR或T4连接反应即可将识别序列插入到供体载体中，其中Cas12a在供体载体中的识别序列的方向与基因组中的靶点的方向是相反的，但远离PAM端的Cas12a识别切割的5个碱基与基因组靶位点的最后5个碱基是相同的，因此可以利用内外源DNA产生的互补粘性末端实现无缝连接。在将外源基因整合到基因组中的特定位点以及在对内源基因进行标记时，相较已有的Cas9HITI策略，MITI可以产生更高的精准插入效率，其有望成为精准基因插入的新工具。

公开(公告)号：CN115806978A

公开(公告)日：2023-03-17

申请号：CN202111076501.4

申请日：2021-09-14

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 吴森 ,  张丽君 ,  郭紫航 ,  秦毓敏 ,  杜旭光

IPC: C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N5/10 ,  C12N15/08 ,  C12N13/00

Abstract: 本发明提供一种异源染色体定向转移的方法，通过向抗药性基因中人为添加包含loxP序列的功能性内含子，并将其拆分为带有包含loxP序列的重叠区域的两部分，拆分后的两部分抗药性基因分别插入供体物种及受体物种的目标染色体中(两部分抗药性基因在Cre重组酶的作用下发生Cre/loxP位点特异性重组，并回复抗药功能)，并借助异种细胞融合方法实现异源染色体定向转移。本方法可广泛应用于基因功能研究、人类疾病模型构建、治疗性抗体开发及药理药效测试等方面。