公开(公告)号：CN103667463A

公开(公告)日：2014-03-26

申请号：CN201310613503.1

申请日：2013-11-27

Applicant: 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所

Inventor： 陈爱亮 ,  吴英 ,  蒋小玲 ,  吕珍珍 ,  刘金钏 ,  杨曙明

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/10 ,  C12Q1/06

CPC classification number: C12Q1/6851 ,  C12Q2531/113 ,  C12Q2563/173 ,  C12Q2563/107

Abstract: 本发明公开了一种利用数字PCR检测待测食品中大肠菌群数量的方法。该方法包括如下步骤：1）富集待测食品中的细菌，将富集物与DNA结合物共同孵育，获得PCR扩增模板；所述DNA结合物为不能穿过完整的细胞膜，但能与细胞膜受损后暴露出来的DNA结合的物质；2）配制PCR反应体系，进行数字PCR反应；所述PCR反应体系中含有所述PCR扩增模板、大肠菌群通用引物对、荧光染料、dNTP和DNA聚合酶；3）根据反应产生的荧光信号，计算所述待测食品中的大肠菌群数量。本方法无需对食品中细菌进行分离培养，检测时间短至3-4小时；同时减少了背景DNA和基质的干扰，灵敏度低至1个拷贝；且该方法无需设置标准曲线，根据结果可直接判读样品中的大肠菌群数量，大大简化了操作步骤。

公开(公告)号：CN103667462A

公开(公告)日：2014-03-26

申请号：CN201310613501.2

申请日：2013-11-27

Applicant: 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所

Inventor： 陈爱亮 ,  吴英 ,  蒋小玲 ,  吕珍珍 ,  刘金钏 ,  杨曙明

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/04

CPC classification number: C12Q1/6851 ,  C12Q2531/113 ,  C12Q2563/173 ,  C12Q2563/159

Abstract: 本发明公开了一种利用数字PCR检测食品中菌落总数的方法。该方法包括如下步骤：1）富集待测食品中的细菌，将富集物与与DNA结合物共同孵育，获得PCR扩增模板；所述DNA结合物为不能穿过完整的细胞膜，但能与细胞膜受损后暴露出来的DNA结合的物质；2）配制PCR反应体系，进行数字PCR反应；所述PCR反应体系中含有所述PCR扩增模板、细菌通用引物对、荧光染料、dNTP和DNA聚合酶；3）根据反应产生的荧光信号，计算所述待测液体食品中的菌落总数。本方法无需对食品中细菌进行分离培养，检测时间缩短至2-3小时；同时大大减少了背景DNA和基质的干扰，灵敏度低至1个拷贝；而且该方法无需设置标准曲线，根据结果可直接判读样品中的菌落总数，大大简化了操作步骤。