基于CRISPR/Cas9 SunTag系统抑制双生病毒侵染的载体及其构建和应用

    公开(公告)号:CN111088277B

    公开(公告)日:2022-01-18

    申请号:CN201911411234.4

    申请日:2019-12-31

    Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR/Cas9 SunTag系统抑制双生病毒侵染的载体及其构建和应用,该方法利用搭载甲基转移酶DRM2的CRISPR/dCas9 Sun Tag系统,构建针对TYLCCNV和TYLCCNB特定区域的sgRNA,从而使得TYLCCNV和TYLCCNB特定区域被DRM2识别并被甲基化。为了增强识别和甲基化的效果,分别设计了三个sgRNA(g16/g17/g9A)靶标TYLCCNV和三个sgRNA(g1/g14/g9B)靶标TYLCCNB的甲基化敏感区域,并将三个sgRNA依次插入pEG302载体,从而得到可以定点靶标并进行甲基化修饰TYLCCNV的pEG302‑A和定点靶标并进行甲基化修饰TYLCCNB的pEG302‑β的抑制双生病毒侵染的载体。

    CRISPR/RfxCas13d抗植物RNA病毒载体及其构建方法和应用

    公开(公告)号:CN111549054A

    公开(公告)日:2020-08-18

    申请号:CN202010443155.8

    申请日:2020-05-22

    Abstract: 本发明公开了一种CRISPR/RfxCas13d抗植物RNA病毒载体及其构建方法和应用,包括pCambia1300-RfxCas13d重组载体,构成如下:CaMV 35S启动子,潮霉素基因,CaMV poly(A)信号终止子,pVS1 RepA,pVS1复制起点,CaMV 35S启动子,RfxCas13d基因,NOS终止子;其中,RfxCas13d基因序列如SEQ ID No.1所示,NOS终止子序列如SEQ ID No.2所示。本发明利用带有GFP荧光标签的芜菁花叶病毒(TuMV-GFP)侵染性克隆来指示RNA病毒自然侵害植物,利用RfxCas13d蛋白和sgRNA结合可以定向特定位置切割RNA。本发明构建的载体能够有效抑制TuMV的侵染,为植物病毒病的防控提供新的策略,具有重要的生产意义。

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