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公开(公告)号：CN106754612A
公开(公告)日：2017-05-31
申请号：CN201710078517.6
申请日：2017-02-14
Applicant: 云南农业大学
CPC classification number: C12N1/36 , C12N1/14 , C12Q1/6895 , C12Q2600/158
Abstract: 本发明公开了一种抑制侵染水稻SA途径相关基因上调的方法，利用弱酸/碱pH5,pH5.5,pH8,pH8.4溶液处理稻瘟菌效应蛋白基因过表达菌株孢子；用不同pH处理后的孢子悬浮液喷雾接种水稻叶片；于0h,24h,48h,72h和96h时间点取样，提取水稻样品总RNA；反转录成cDNA，real‑timeRT‑PCR检测cDNA；分析SA途径相关的两个主要基因PAL和EDS1在不同时间点的表达。与现有技术相比，本发明提供一种更为简便、直接有效准确地定量弱酸/碱处理的病原菌基因过表达菌株侵染水稻后对水稻SA途径相关基因表达的影响，为更快速准确地分析水稻与稻瘟病菌互作时对弱酸/碱响应机制的研究提供重要的实验依据。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN106754614A
公开(公告)日：2017-05-31
申请号：CN201710078834.8
申请日：2017-02-14
Applicant: 云南农业大学
CPC classification number: C12N1/36 , C12N1/14 , C12Q1/6895 , C12Q2600/158
Abstract: 本发明公开了一种抑制侵染水稻PCD途径相关基因上调的方法，采用弱酸处理稻瘟菌效应蛋白基因过表达菌株孢子；用悬浮液喷雾接种水稻叶片；于不同时间点取样，提取水稻样品总RNA；反转录成cDNA，real‑time RT‑PCR检测cDNA；分析PCD途径相关的主要基因PR1a和PR5在不同时间点的表达。与现有技术相比，本发明克服了研究非生物环境pH影响寄主‑病原互作机制中，常借助温室设计各种弱酸处理以观察寄主表型变化、以及筛选大量水稻防御相关基因表达等周期长和效率低的弊端，提供了一种更为简便、有效、准确地弱酸处理病原菌孢子、定量检测水稻PCD途径主要相关基因表达的方法，为更快速准确地进行弱酸对水稻与稻瘟病菌互作机制的研究提供重要的实验依据。
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公开(公告)号：CN105586334B
公开(公告)日：2019-05-17
申请号：CN201610065875.9
申请日：2016-01-29
Applicant: 云南农业大学
IPC: C12N15/10
Abstract: 本发明公开了一种黑痣菌子囊果提取基因组DNA的方法，与现有技术相比，本发明直接以黑痣菌子囊果为材料，进行DNA提取的方法。在进行DNA提取前，采用裂解液缓冲液处理2次，利用低温下DNA溶解度低的原理去除过多的胶质和多糖，最后加入提取液裂解细胞膜，进行DNA的提取，提取过程中加苯酚‑氯仿‑异戊醇进行抽提去除多余的蛋白。本方法适用于含有胶质和多糖、蛋白等含量高的较高的真菌材料，此类杂质存在和含量对所抽提到的DNA的产量和质量均无明显的影响，为黑痣菌的后续分子研究提供了保证，具有推广使用的价值。
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公开(公告)号：CN106754613A
公开(公告)日：2017-05-31
申请号：CN201710078526.5
申请日：2017-02-14
Applicant: 云南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种稻瘟菌效应蛋白基因过表达菌株降低对pH敏感性的方法，分别用pH5和pH8处理稻瘟病菌效应蛋白基因过表达菌株孢子，统计产孢量、孢子萌发率及附着胞形成率。与现有技术相比，本发明提供一种更为简便、有效准确地确定稻瘟菌效应蛋白基因过表达菌株对不同pH的敏感性，为快速了解过病原菌效应蛋白基因过表达菌株的致病性提供了重要的参考依据。
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公开(公告)号：CN105586334A
公开(公告)日：2016-05-18
申请号：CN201610065875.9
申请日：2016-01-29
Applicant: 云南农业大学
IPC: C12N15/10
Abstract: 本发明公开了一种黑痣菌子囊果提取基因组DNA的方法，与现有技术相比，本发明直接以黑痣菌子囊果为材料，进行DNA提取的方法。在进行DNA提取前，采用裂解液缓冲液处理2次，利用低温下DNA溶解度低的原理去除过多的胶质和多糖，最后加入提取液裂解细胞膜，进行DNA的提取，提取过程中加苯酚-氯仿-异戊醇进行抽提去除多余的蛋白。本方法适用于含有胶质和多糖、蛋白等含量高的较高的真菌材料，此类杂质存在和含量对所抽提到的DNA的产量和质量均无明显的影响，为黑痣菌的后续分子研究提供了保证，具有推广使用的价值。
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公开(公告)号：CN106929571A
公开(公告)日：2017-07-07
申请号：CN201710078835.2
申请日：2017-02-14
Applicant: 云南农业大学
IPC: C12Q1/68
CPC classification number: C12Q1/6895 , C12Q1/686 , C12Q2600/13 , C12Q2600/158 , C12Q2561/113 , C12Q2563/107 , C12Q2545/114 , C12Q2521/107
Abstract: 本发明公开了一种检测稻瘟病菌与水稻互作时PWL2基因的上调表达的方法，采用稻瘟菌效应蛋白基因过表达菌株孢子喷雾接种到水稻叶片上；于0h,24h,48h,72h和96h的五个时间点取样；real‑time RT‑PCR分析受侵染水稻不同时间点4个稻瘟菌效应蛋白基因的表达；对水稻相关抗性基因的表达水平进行计算。与现有技术相比，本发明克服了已有研究病原菌效应蛋白在病菌与寄主互作时功能研究的费时周期长等弊端，最终达到为今后研究病原菌效应蛋白在病菌与寄主互作时功能提供更为快速有效直接准确的目的。
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