黑暗接种稻瘟菌诱导OsPIL1转基因水稻株系防御响应及鉴定方法

    公开(公告)号:CN115418410B

    公开(公告)日:2023-05-16

    申请号:CN202211221748.5

    申请日:2022-10-08

    Abstract: 本发明涉及植物基因工程技术领域,具体来说是一种黑暗接种稻瘟菌诱导OsPIL1转基因水稻株系防御响应及鉴定方法,方法包括:水稻培养、稻瘟病菌孢子悬浮液制备、稻瘟病菌接种、转基因水稻防御相关基因表达验证和病害调查。本发明通过OsPIL1过表达水稻株系在黑暗条件下接种稻瘟菌,诱导水稻防御响应,从而提高转基因水稻抗稻瘟病能力,提升转基因水稻品质和产量。

    黑暗接种稻瘟菌诱导OsPIL1转基因水稻株系防御响应及鉴定方法

    公开(公告)号:CN115418410A

    公开(公告)日:2022-12-02

    申请号:CN202211221748.5

    申请日:2022-10-08

    Abstract: 本发明涉及植物基因工程技术领域,具体来说是一种黑暗接种稻瘟菌诱导OsPIL1转基因水稻株系防御响应及鉴定方法,方法包括:水稻培养、稻瘟病菌孢子悬浮液制备、稻瘟病菌接种、转基因水稻防御相关基因表达验证和病害调查。本发明通过OsPIL1过表达水稻株系在黑暗条件下接种稻瘟菌,诱导水稻防御响应,从而提高转基因水稻抗稻瘟病能力,提升转基因水稻品质和产量。

    一种检测稻瘟菌效应蛋白从水稻根部转移至叶缘的方法

    公开(公告)号:CN105181965A

    公开(公告)日:2015-12-23

    申请号:CN201510602926.2

    申请日:2015-09-21

    CPC classification number: G01N33/56961

    Abstract: 本发明公开了一种检测稻瘟菌效应蛋白从水稻根部转移至叶缘的方法,它涉及植物保护和生物技术领域,它将稻瘟病菌效应蛋白基因表达产物于4℃离心机离心收集菌体,用新鲜配制的缓冲液悬浮菌体,在冰水浴上进行超生破碎细胞后离心收集上清,将该原核表达产物,利用GST纯化柱纯化,将纯化后的表达产物按照5.0mg/ml的浓度处理感病水稻品种丽江新团黑谷的根尖0.5cm处6h,灭菌水漂洗4h,将处理后的水稻植株的叶片进行石蜡切片,用免疫细胞化学方法处理水稻叶片切片,共聚焦显微镜观察根尖皮层细胞微管骨架;它鉴定到了一种从水稻根部转移至地上部叶缘的稻瘟病菌效应蛋白,可为今后进一步研究提供重要的实验依据。

    一种检测稻瘟菌基因增强稻瘟病菌株致病力的方法

    公开(公告)号:CN105177145A

    公开(公告)日:2015-12-23

    申请号:CN201510604347.1

    申请日:2015-09-21

    CPC classification number: C12Q1/6895

    Abstract: 本发明公开了一种检测稻瘟菌基因增强稻瘟病菌株致病力的方法,它涉及植物保护和生物技术领域,调查水稻抗感反应、real-time RT-PCR分析水稻早期响应的防御相关基因表达以及qPCR检测病斑的真菌相对生长量。基因的原核表达产物按照1.0μg/ml~6.0 μg/ml浓度喷雾水稻叶片24h再接种强/弱致病菌株,调查抗感反应以及real-time RT-PCR分析水稻防御相关基因表达;再利用该基因的过表达菌株离体接种水稻叶片,调查抗感反应、real-time RT-PCR分析水稻防御相关基因表达以及qPCR分析病斑上的真菌相对生长量。它可全面准确地明确病原菌效应蛋白基因提高病原菌侵染力,最终达到为今后测定病原菌效应蛋白提高病原菌侵染力的方法提供准确全面的方法的目的。

    一种检测稻瘟菌基因促进稻瘟病菌菌丝生长和产孢的方法

    公开(公告)号:CN105177107A

    公开(公告)日:2015-12-23

    申请号:CN201510602667.3

    申请日:2015-09-21

    Abstract: 本发明公开了一种检测稻瘟菌基因促进稻瘟病菌菌丝生长和产孢的方法,它涉及植物保护和生物技术领域,它将基因的原核表达产物加于培马铃薯蔗糖养基中,再将菌落接种于含有原核表达产物的PSA培养基中于28℃振荡培养箱中培养三天,过滤菌丝烘干称重;同时收集滤液,进行孢子计数。它提供一种更为简便、快速的确定病菌基因对病菌自身的影响,为更准确分析基因功能奠定重要的实验基础。

    一种观测融合蛋白长距离转运至水稻叶芽的方法

    公开(公告)号:CN103175810B

    公开(公告)日:2015-09-02

    申请号:CN201210554731.1

    申请日:2012-12-05

    CPC classification number: G01N21/6458

    Abstract: 本发明公开了一种观测融合蛋白长距离转运至水稻叶芽的方法,该方法将GFP融合蛋白处理水稻根尖后,处理过根尖的水稻植株叶芽进行冷冻切片,切片后PI荧光染料进行染色,共聚焦显微镜直接观测GFP融合蛋白从水稻根尖转运至叶芽。该方法利用GFP融合蛋白处理水稻根尖0.5cm处,叶芽被冷冻切片后PI染色,共聚焦显微镜观测GFP融合蛋白从水稻根尖转运至叶芽,能直接定性地了解GFP融合蛋白在水稻植株内的长距离转运情况。GFP融合蛋白直接处理水稻根尖0.5cm处,共聚焦显微镜观测GFP融合蛋白转运至叶芽可为进一步开展效应蛋白能引起水稻系统防御反应提供非常强有力的证据。该方法简便、准确、快速。

    一种直接从感病小麦叶片上高效快速提取小麦条锈菌DNA的方法

    公开(公告)号:CN102634509B

    公开(公告)日:2014-04-16

    申请号:CN201210126926.6

    申请日:2012-04-27

    Abstract: 本发明公开了一种直接从感病小麦叶片上高效快速提取小麦条锈菌DNA的方法,其特征在于,吸取20μl配好的20%的chelex-100混悬液于100μl PCR管中,吸取5μl的Chelex-100上清液于长有小麦条锈菌夏孢子小麦叶片上,并在滴有Chelex-100上清液的病斑处反复涂抹叶片多次,将锈孢子洗下后,吸回叶片上含有锈孢子的Chelex-100上清液并加入到装有20μl 20%chelex-100混悬液的PCR管中,用移液器反复吸取混匀,放入沸水浴中水浴2min,再放到旋涡混合器上振荡混匀10s,水浴5min后保存于-20℃备用,上清液均可作为PCR的模板。建立一套高效、快速、可直接从感小麦条锈病菌的植株上提取小麦条锈病菌DNA作为PCR扩增模板的方法。

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