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公开(公告)号：CN103740865B
公开(公告)日：2015-04-01
申请号：CN201410034604.8
申请日：2014-01-25
Applicant: 云南省烟草农业科学研究院 , 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所
Abstract: 本发明公开了一种烟草花叶型病株中烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒、烟草脉带花叶病毒3种病毒的检测方法。通过烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒、烟草脉带花叶病毒特异性混合抗体诱捕病样中病毒，不必提取样品总RNA进行随机引物逆转录和特异性病毒引物复合PCR反应，专门针对烟草生产过程对烟草中上部叶片为害较为严重且不能从症状区分病原而建立的一种单管同时检测3种病毒中的1、2或3种不同病毒组合的方法，检测时间仅需5小时。本方法将快速、特异的免疫沉淀与灵敏的复合RT-PCR结合，同时设置健康烟草随机引物cDNA产物和相应病毒PCR特异片段阳性质粒作为阴、阳性对照，从而快速、准确、灵敏的检测田间烟草植株样品、抗病毒材料及田间环境疑似侵染源等。
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公开(公告)号：CN105548544A
公开(公告)日：2016-05-04
申请号：CN201610077299.X
申请日：2016-02-04
Applicant: 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所
IPC: G01N33/569
CPC classification number: G01N33/56983
Abstract: 本发明公开了一种朱顶红褪绿环斑病毒检测试剂盒及其检测方法与应用。朱顶红褪绿环斑病毒检测试剂盒包括盒体、硝酸纤维素膜、显色液试剂瓶、抗体试剂瓶、对照试剂瓶；所述的显色液试剂瓶包括显色试剂瓶A和显色液试剂瓶B；所述的抗体试剂瓶包括一抗试剂瓶和二抗试剂瓶；所述的对照试剂瓶包括HCRV标准阳性对照试剂瓶和HCRV标准阴性对照试剂瓶。应用为所述的朱顶红褪绿环斑病毒检测试剂盒在检测朱顶红褪绿环斑病毒中的应用。
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公开(公告)号：CN105548543A
公开(公告)日：2016-05-04
申请号：CN201610077250.4
申请日：2016-02-04
Applicant: 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所
IPC: G01N33/569
CPC classification number: G01N33/56983
Abstract: 本发明公开了一种花生黄色斑点病毒检测试剂盒及其检测方法与应用。花生黄色斑点病毒检测试剂盒包括盒体、硝酸纤维素膜、显色液试剂瓶、抗体试剂瓶、对照试剂瓶；所述的显色液试剂瓶包括显色试剂瓶A和显色液试剂瓶B；所述的抗体试剂瓶包括一抗试剂瓶和二抗试剂瓶；所述的对照试剂瓶包括GYSV标准阳性对照试剂瓶和GYSV标准阴性对照试剂瓶。应用为所述的花生黄色斑点病毒检测试剂盒在检测花生黄色斑点病毒中的应用。
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公开(公告)号：CN103757138B
公开(公告)日：2015-02-25
申请号：CN201410034605.2
申请日：2014-01-25
Applicant: 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所
Abstract: 本发明公开了一种云南马铃薯主栽品种丽薯6号、云薯401、宣薯2号病株中马铃薯Y病毒、马铃薯X病毒、马铃薯A病毒和马铃薯卷叶病毒4种病毒的检测方法。本发明通过对云南马铃薯主栽品种丽薯6号、云薯401、宣薯2号病株中马铃薯Y病毒、马铃薯X病毒、马铃薯A病毒和马铃薯卷叶病毒4种特异性混合抗体诱捕病样中病毒，不必提取样品总RNA进行随机引物逆转录和特异性病毒引物复合PCR反应。本方法将快速、特异的免疫沉淀与灵敏的复合RT-PCR结合，同时设置健康马铃薯随机引物cDNA产物和相应病毒PCR特异片段阳性质粒作为阴、阳性对照，从而快速、准确、灵敏的应用于检测田间马铃薯植株样品、抗病毒材料及田间环境疑似侵染源等方面。
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公开(公告)号：CN103760346A
公开(公告)日：2014-04-30
申请号：CN201410034665.4
申请日：2014-01-25
Applicant: 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所
IPC: G01N33/569 , G01N21/64
CPC classification number: G01N33/56983 , G01N33/582
Abstract: 本发明公开了一种定量检测植物病毒的荧光免疫斑点法，是将待测样品研磨，制备检测样品上样液，配制阳性、阴性及空白对照上样液，测出阳性对照上样液的病毒粒体平均数d。将2.0~2.5μl检测样品上样液、阳性、阴性及空白对照上样液分别点在硝酸纤维素膜上，将膜干燥后封闭0.8~1.2h，依次加入稀释后的一抗、二抗，分别反应0.8~1.2h，每次反应后洗膜3~4次，每次5~6min。将膜稍干燥后置于荧光分光光度计中检测荧光强度m，按照下述公式计算检测样品上样液中待检测病毒的粒体平均数d。阳性对照上样液m值：阳性对照上样液d值=检测样品上样液m值：检测样品上样液d值。所述方法能够实现植物病毒的灵敏准确、快捷高效的定量分析，推广应用价值较高。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN103757138A
公开(公告)日：2014-04-30
申请号：CN201410034605.2
申请日：2014-01-25
Applicant: 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所
CPC classification number: C12Q1/70 , C12Q1/6804 , C12Q2531/113 , C12Q2545/101
Abstract: 本发明公开了一种云南马铃薯主栽品种丽薯6号、云薯401、宣薯2号病株中马铃薯Y病毒、马铃薯X病毒、马铃薯A病毒和马铃薯卷叶病毒4种病毒的检测方法。本发明通过对云南马铃薯主栽品种丽薯6号、云薯401、宣薯2号病株中马铃薯Y病毒、马铃薯X病毒、马铃薯A病毒和马铃薯卷叶病毒4种特异性混合抗体诱捕病样中病毒，不必提取样品总RNA进行随机引物逆转录和特异性病毒引物复合PCR反应。本方法将快速、特异的免疫沉淀与灵敏的复合RT-PCR结合，同时设置健康马铃薯随机引物cDNA产物和相应病毒PCR特异片段阳性质粒作为阴、阳性对照，从而快速、准确、灵敏的应用于检测田间马铃薯植株样品、抗病毒材料及田间环境疑似侵染源等方面。
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公开(公告)号：CN104198713B
公开(公告)日：2016-02-10
申请号：CN201410450554.1
申请日：2014-09-05
Applicant: 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所
IPC: G01N33/577 , G01N33/569 , G01N21/78
Abstract: 本发明公开了一种快速检测蓟马体内番茄斑萎病毒的方法，将待测的1头或几头蓟马放置到画好分隔的硝酸纤维素膜上，加2μl样品处理缓冲液，用移液枪头将蓟马磨碎于缓冲液中，依次处理不同虫体样品，同样吸取2μl阳性和阴性对照液点在硝酸纤维素膜上；待膜干燥后，用PBST缓冲液配制的5%脱脂奶粉封闭1h,再加入封闭液稀释的一抗培育1h,之后洗膜3次；加入封闭液稀释的二抗培育1h，再洗膜3次；加入显色液显色15min，弃去显色液加入蒸馏水终止显色反应，即可进行结果分析。本发明操作方便、快速、测定结果有良好的稳定性、重现性和准确性，能满足蓟马体内番茄斑萎病毒的检测需要，为尽量避免番茄斑萎病毒的危害奠定了基础。
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公开(公告)号：CN103760346B
公开(公告)日：2015-06-24
申请号：CN201410034665.4
申请日：2014-01-25
Applicant: 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所
IPC: G01N33/569 , G01N21/64
Abstract: 本发明公开了一种定量检测植物病毒的荧光免疫斑点法，是将待测样品研磨，制备检测样品上样液，配制阳性、阴性及空白对照上样液，测出阳性对照上样液的病毒粒体平均数d。将2.0~2.5μl检测样品上样液、阳性、阴性及空白对照上样液分别点在硝酸纤维素膜上，将膜干燥后封闭0.8~1.2h，依次加入稀释后的一抗、二抗，分别反应0.8~1.2h，每次反应后洗膜3~4次，每次5~6min。将膜稍干燥后置于荧光分光光度计中检测荧光强度m，按照下述公式计算检测样品上样液中待检测病毒的粒体平均数d。阳性对照上样液m值：阳性对照上样液d值=检测样品上样液m值：检测样品上样液d值。所述方法能够实现植物病毒的灵敏准确、快捷高效的定量分析，推广应用价值较高。
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公开(公告)号：CN104198713A
公开(公告)日：2014-12-10
申请号：CN201410450554.1
申请日：2014-09-05
Applicant: 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所
IPC: G01N33/577 , G01N33/569 , G01N21/78
CPC classification number: G01N33/56983 , G01N21/78
Abstract: 本发明公开了一种快速检测蓟马体内番茄斑萎病毒的方法，将待测的1头或几头蓟马放置到画好分隔的硝酸纤维素膜上，加2μl样品处理缓冲液，用移液枪头将蓟马磨碎于缓冲液中，依次处理不同虫体样品，同样吸取2μl阳性和阴性对照液点在硝酸纤维素膜上；待膜干燥后，用PBST缓冲液配制的5%脱脂奶粉封闭1h,再加入封闭液稀释的一抗培育1h,之后洗膜3次；加入封闭液稀释的二抗培育1h，再洗膜3次；加入显色液显色15min，弃去显色液加入蒸馏水终止显色反应，即可进行结果分析。本发明操作方便、快速、测定结果有良好的稳定性、重现性和准确性，能满足蓟马体内番茄斑萎病毒的检测需要，为尽量避免番茄斑萎病毒的危害奠定了基础。
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公开(公告)号：CN103740865A
公开(公告)日：2014-04-23
申请号：CN201410034604.8
申请日：2014-01-25
Applicant: 云南省烟草农业科学研究院 , 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所
CPC classification number: C12Q1/70 , C12Q1/6804 , C12Q2537/143
Abstract: 本发明公开了一种烟草花叶型病株中烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒、烟草脉带花叶病毒3种病毒的检测方法。通过烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒、烟草脉带花叶病毒特异性混合抗体诱捕病样中病毒，不必提取样品总RNA进行随机引物逆转录和特异性病毒引物复合PCR反应，专门针对烟草生产过程对烟草中上部叶片为害较为严重且不能从症状区分病原而建立的一种单管同时检测3种病毒中的1、2或3种不同病毒组合的方法，检测时间仅需5小时。本方法将快速、特异的免疫沉淀与灵敏的复合RT-PCR结合，同时设置健康烟草随机引物cDNA产物和相应病毒PCR特异片段阳性质粒作为阴、阳性对照，从而快速、准确、灵敏的检测田间烟草植株样品、抗病毒材料及田间环境疑似侵染源等。
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