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公开(公告)号：CN110499325A
公开(公告)日：2019-11-26
申请号：CN201910630368.9
申请日：2019-07-12
Applicant: 北京林业大学
Abstract: 本发明提供一种TRV-based病毒诱导的报春花属植物基因沉默的方法。包括：A、根据报春花属植物目标基因，设计引物并扩增出该目标基因的DNA片段；B、将DNA片段连接到pTRV2载体上，得到重组载体；C、将pTRV1、重组载体分别转化农杆菌，所得转化子共同侵染植株。本发明首次证明TRV可成功应用于小报春基因沉默和功能验证，为报春花属植物的基因功能验证奠定了基础。本发明方法简单、研究周期短、无需基因全长和转化体系，获得目的表型效率高，可实现大量基因的快速功能验证。与现有的VIGS体系相比，本发明表型持续时间长，且在植株的不同部位均出现表型变化，对报春花属异型自交不亲和的遗传学研究具有重要意义。
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公开(公告)号：CN108949809B
公开(公告)日：2022-03-08
申请号：CN201810729116.7
申请日：2018-07-05
Applicant: 北京林业大学
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，具体公开了一种连翘叶片TRV载体介导病毒诱导基因沉默的方法。所述方法为：将含有特定目标基因片段的TRV2载体和TRV1载体分别转化到农杆菌感受态中；筛选得到阳性菌株后，进行增殖培养得到含有不同载体的两种单克隆菌体；将两种单克隆菌体离心并利用侵染液分别重悬菌体至OD600＝0.9～1.1后，将二者等体积混合，得到混合侵染液；将所述混合侵染液注入连翘中，实现对特定目标基因的沉默。本发明深入探究了可提高侵染成功效率的关键因素，筛选出了最优的侵染液组成配方和侵染时含有菌体的侵染液的OD值。利用本发明所述方法对连翘进行侵染，可使连翘叶片VIGS侵染的成功率达90％以上。
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公开(公告)号：CN110499325B
公开(公告)日：2021-04-23
申请号：CN201910630368.9
申请日：2019-07-12
Applicant: 北京林业大学
Abstract: 本发明提供一种TRV‑based病毒诱导的报春花属植物基因沉默的方法。包括：A、根据报春花属植物目标基因，设计引物并扩增出该目标基因的DNA片段；B、将DNA片段连接到pTRV2载体上，得到重组载体；C、将pTRV1、重组载体分别转化农杆菌，所得转化子共同侵染植株。本发明首次证明TRV可成功应用于小报春基因沉默和功能验证，为报春花属植物的基因功能验证奠定了基础。本发明方法简单、研究周期短、无需基因全长和转化体系，获得目的表型效率高，可实现大量基因的快速功能验证。与现有的VIGS体系相比，本发明表型持续时间长，且在植株的不同部位均出现表型变化，对报春花属异型自交不亲和的遗传学研究具有重要意义。
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公开(公告)号：CN108949809A
公开(公告)日：2018-12-07
申请号：CN201810729116.7
申请日：2018-07-05
Applicant: 北京林业大学
CPC classification number: C12N15/8218 , C12N9/001 , C12Y103/99
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，具体公开了一种连翘叶片TRV载体介导病毒诱导基因沉默的方法。所述方法为：将含有特定目标基因片段的TRV2载体和TRV1载体分别转化到农杆菌感受态中；筛选得到阳性菌株后，进行增殖培养得到含有不同载体的两种单克隆菌体；将两种单克隆菌体离心并利用侵染液分别重悬菌体至OD600＝0.9～1.1后，将二者等体积混合，得到混合侵染液；将所述混合侵染液注入连翘中，实现对特定目标基因的沉默。本发明深入探究了可提高侵染成功效率的关键因素，筛选出了最优的侵染液组成配方和侵染时含有菌体的侵染液的OD值。利用本发明所述方法对连翘进行侵染，可使连翘叶片VIGS侵染的成功率达90％以上。
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