公开(公告)号：CN102485891B

公开(公告)日：2013-05-01

申请号：CN201010573017.8

申请日：2010-12-01

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 陆诗敏 ,  何绪刚 ,  廖明军 ,  谢从新 ,  张敏

IPC: C12N15/10

Abstract: 本发明属于淡水沉积物DNA样品制备技术领域，具体涉及一种从淡水沉积物中提取DNA的方法。以淡水沉积物为材料，采用适当浓度的明矾溶液来去除底泥中的腐殖质，用焦磷酸钠作为分散剂将微生物与沉积物分离开，用CTAB和SDS联合裂解细胞，PEG沉淀，能将底泥中的绝大部分腐殖质去除。用此法得到的DNA在260和280处的吸光值的比值在1.8左右，260和230处的吸光值的比值在2.0左右，接近理想值，不做稀释，不用试剂盒纯化，能直接用于PCR反应。本发明得到的DNA纯度高，得率稳定，获取的DNA量大，无明显剪切现象，价格低廉，操作简单，可用于商业试剂盒的组装。

公开(公告)号：CN102485891A

公开(公告)日：2012-06-06

申请号：CN201010573017.8

申请日：2010-12-01

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 陆诗敏 ,  何绪刚 ,  廖明军 ,  谢从新 ,  张敏

IPC: C12N15/10

Abstract: 本发明属于淡水沉积物DNA样品制备技术领域，具体涉及一种从淡水沉积物中提取DNA的方法。以淡水沉积物为材料，采用适当浓度的明矾溶液来去除底泥中的腐殖质，用焦磷酸钠作为分散剂将微生物与沉积物分离开，用CTAB和SDS联合裂解细胞，PEG沉淀，能将底泥中的绝大部分腐殖质去除。用此法得到的DNA在260和280处的吸光值的比值在1.8左右，260和230处的吸光值的比值在2.0左右，接近理想值，不做稀释，不用试剂盒纯化，能直接用于PCR反应。本发明得到的DNA纯度高，得率稳定，获取的DNA量大，无明显剪切现象，价格低廉，操作简单，可用于商业试剂盒的组装。

公开(公告)号：CN102321729A

公开(公告)日：2012-01-18

申请号：CN201110187705.5

申请日：2011-07-06

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 廖明军 ,  何绪刚 ,  谢从新 ,  陆诗敏 ,  张敏

IPC: C12Q1/06

Abstract: 一种检测土壤和沉积物中细菌数量的荧光显微计数方法，属于环境微生物学领域。所述检测方法包括以下步骤：(1)配制样品稀释液和抗褪色剂；(2)将样品加入到样品稀释液中进行处理，制成样品计数液。取样品计数液到离心管中，加入10×的SYBR Green I荧光染料，避光染色后加入抗褪色剂，制成染色样品；(3)将洁净的盖玻片盖在干净的血球计数板计数室上，涡旋混匀染色样品，用移液器取染色样品，沿盖玻片边缘加样，使染色样品充满计数室。将加样的血球计数板静置5min，置荧光显微镜载物台上，以480nm光波激发，40倍物镜下观察，计数5个中方格中细菌颗粒的数量。最后按公式Y＝31.25×A×106计算出1g样品中细菌的数量，其中Y表示1g样品中细菌的数量，A表示一个中方格中细菌的平均数。该方法省时省力、成本低廉、抗褪色，能快速准确检测出泥土和沉积物中细菌的数量。

公开(公告)号：CN102321729B

公开(公告)日：2013-06-05

申请号：CN201110187705.5

申请日：2011-07-06

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 廖明军 ,  何绪刚 ,  谢从新 ,  陆诗敏 ,  张敏

IPC: C12Q1/06

Abstract: 一种检测土壤和沉积物中细菌数量的荧光显微计数方法，属于环境微生物学领域。所述检测方法包括以下步骤：(1)配制样品稀释液和抗褪色剂；(2)将样品加入到样品稀释液中进行处理，制成样品计数液。取样品计数液到离心管中，加入10×的SYBR Green I荧光染料，避光染色后加入抗褪色剂，制成染色样品；(3)将洁净的盖玻片盖在干净的血球计数板计数室上，涡旋混匀染色样品，用移液器取染色样品，沿盖玻片边缘加样，使染色样品充满计数室。将加样的血球计数板静置5min，置荧光显微镜载物台上，以480nm光波激发，40倍物镜下观察，计数5个中方格中细菌颗粒的数量。最后按公式Y＝31.25×A×106计算出1g样品中细菌的数量，其中Y表示1g样品中细菌的数量，A表示一个中方格中细菌的平均数。该方法省时省力、成本低廉、抗褪色，能快速准确检测出泥土和沉积物中细菌的数量。