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公开(公告)号：CN103468733B
公开(公告)日：2016-01-27
申请号：CN201310321355.6
申请日：2013-07-26
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N15/66 , C12N15/63 , C12N5/10 , C12N15/873 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了一种抗猪圆环病毒2型的表达载体和转基因猪及其构建方法，属于基因工程领域。所述表达载体是通过分别将H1启动子和pPB-sh2序列连接到pUC57-H1质粒上，再将含有loxP-Neo/EGFP基因表达盒的融合片段连接到pPB-H1-sh2上构建得到的。将该载体导入猪的基因组，并采用体细胞核移植技术生产出转基因猪。本发明的表达载体具有piggyBac转座子，极大地提高了转基因效率，且将普通质粒串联重组的转基因整合模式变成了单位点单拷贝整合，更好的模拟生物基因的内环境。构建的转基因猪通过自身合成siRNA来降解PCV2mRNA，可从根本上抑制猪圆环病毒2型的感染。
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公开(公告)号：CN103966188A
公开(公告)日：2014-08-06
申请号：CN201410161721.0
申请日：2014-04-22
Applicant: 华南农业大学
CPC classification number: C12N9/244 , C12Y302/01006
Abstract: 本发明公开了一种可在动物细胞表达分泌的重组葡聚糖酶及其重组方法和应用。所述可在动物细胞表达分泌的重组葡聚糖酶的核苷酸序列为SEQ ID No:1或SEQ ID No:3。所述重组葡聚糖酶是经过对微生物源基因进行密码子改造和信号肽替换，筛选到适合在动物细胞表达分泌的2个葡聚糖酶基因；经对该两个基因重组改造，获得两个可在动物细胞表达分泌新的重组酶。本发明获得的两个全新的重组β-葡聚糖酶pBgA3pEG和pBg2ApEG可在动物细胞表达分泌，具有更宽pH适应性和耐受性，不但可以用于动物饲料酶制剂开发，同时可以用于转基因动物生产。
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公开(公告)号：CN108060117B
公开(公告)日：2021-08-20
申请号：CN201711245659.3
申请日：2017-12-01
Applicant: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC: C12N5/073
Abstract: 本发明涉及动物克隆方法领域，具体涉及一种提高猪克隆胚胎发育效率的方法。本发明方法主要包括在猪克隆胚胎的基础培养液中添加母猪的子宫液。本发明方法显著提高了克隆胚胎早期发育的囊胚率和囊胚内总细胞数。通过早期胚胎的转录组测序结果显示添加母猪子宫液培养使克隆胚胎与正常体内受精胚胎之间的差异表达基因数目减少。最为重要的是，通过添加母猪子宫液还提高了克隆胚胎的受体母猪的分娩率和窝均活仔数，表明本发明方法有效地提高了克隆胚胎体内发育的最终效率。
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公开(公告)号：CN108060117A
公开(公告)日：2018-05-22
申请号：CN201711245659.3
申请日：2017-12-01
Applicant: 广东温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC: C12N5/073
CPC classification number: C12N5/0604 , C12N2500/84
Abstract: 本发明涉及动物克隆方法领域，具体涉及一种提高猪克隆胚胎发育效率的方法。本发明方法主要包括在猪克隆胚胎的基础培养液中添加母猪的子宫液。本发明方法显著提高了克隆胚胎早期发育的囊胚率和囊胚内总细胞数。通过早期胚胎的转录组测序结果显示添加母猪子宫液培养使克隆胚胎与正常体内受精胚胎之间的差异表达基因数目减少。最为重要的是，通过添加母猪子宫液还提高了克隆胚胎的受体母猪的分娩率和窝均活仔数，表明本发明方法有效地提高了克隆胚胎体内发育的最终效率。
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公开(公告)号：CN104946581B
公开(公告)日：2017-10-13
申请号：CN201510210334.6
申请日：2015-04-28
Applicant: 广东温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC: C12N5/0735
Abstract: 本发明公开了一种培养猪滋养层干细胞的专用培养基及方法，该专用培养基成分包括bFGF、activin A、Y27632、Knockout SR和β‑巯基乙醇。培养方法是将干细胞培养器皿预先用细胞外基质包被；然后将猪囊胚用蛋白酶消化去除透明带，转入干细胞培养器皿中，添加本发明的专用培养基；培养至形成总细胞数为1000~2000个的滋养层干细胞克隆团时，消化成单细胞，转入新的经细胞外基质包被的培养器皿进行细胞的传代培养。本发明的专用培养基成分确定，使用安全性高，避免异源细胞的污染。培养方法简单高效，对猪滋养层干细胞培养具有克隆形成率高、细胞凋亡率低、增殖传代能力强和安全稳定的优点。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN107227298A
公开(公告)日：2017-10-03
申请号：CN201710339889.X
申请日：2017-05-15
Applicant: 华南农业大学
CPC classification number: C12N5/0604 , C12N5/0609 , C12N2500/05 , C12N2500/30 , C12N2500/32 , C12N2500/33
Abstract: 本发明公开了一种克隆胚胎处理液，由BIX‑01294和PZM培养液构成，PZM培养液中BIX‑01294的浓度为5nM～500nM；其中，PZM培养液由以下组分组成：NaCl 3.156g；NaHCO3 1.053g；KCl 0.373g；KH2SO4 0.024g；MgSO4 0.049g；乳酸钙0.308g；丙酮酸0.011g；L‑谷氨酸0.073g；亚牛磺酸0.273g；BME 10mL；MEM 5mL；青霉素0.033g；链霉素0.025g；Sigma水补足定容至500mL。采用以上技术方案的克隆胚胎处理液对克隆胚胎进行培养处理可以达到以下有益效果：(1)能够显著降低细胞SUV39H1、SETdb1、DNMT1或者DNMT3a的基因表达；(2)能够明显下调胚胎早期发育阶段的2cell、4cell的H3K9me2水平。
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公开(公告)号：CN108285906B
公开(公告)日：2021-07-09
申请号：CN201711477805.5
申请日：2017-12-29
Applicant: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC: C12N15/85 , C12N5/10 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了一种定点整合外源DNA转基因猪的构建方法，包括以下步骤：S1、安全靶点筛选及靶点绑定gRNA切割效率验证；S2、构建同源臂供体质粒，并获得定点整合转基因细胞系；S3、外源DNA定点整合转基因猪的构建。本发明在供体质粒中引入gRNA靶点序列，利用细胞内转录gRNA诱导Cas9核酸酶切割靶基因同时，线性化供体质粒，大大简化试验步骤，节约人力，且有利于提高共转染效率。本发明定点整合所用载体较少，同源臂大小适中，更有利于获得转基因细胞系，将高效定点整合技术，高活力定点转基因细胞培育技术与体细胞克隆技术结合，有利于定点整合转基因动物高效制备，加快转基因动物新品种培育速度。
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公开(公告)号：CN107227298B
公开(公告)日：2021-06-25
申请号：CN201710339889.X
申请日：2017-05-15
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种克隆胚胎处理液，由BIX‑01294和PZM培养液构成，PZM培养液中BIX‑01294的浓度为5nM～500nM；其中，PZM培养液由以下组分组成：NaCl 3.156g；NaHCO31.053g；KCl 0.373g；KH2SO40.024g；Mg SO40.049g；乳酸钙0.308g；丙酮酸0.011g；L‑谷氨酸0.073g；亚牛磺酸0.273g；BME 10mL；MEM 5mL；青霉素0.033g；链霉素0.025g；Sigma水补足定容至500mL。采用以上技术方案的克隆胚胎处理液对克隆胚胎进行培养处理可以达到以下有益效果：(1)能够显著降低细胞SUV39H1、SETdb1、DNMT1或者DNMT3a的基因表达；(2)能够明显下调胚胎早期发育阶段的2cell、4cell的H3K9me2水平。
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公开(公告)号：CN108285906A
公开(公告)日：2018-07-17
申请号：CN201711477805.5
申请日：2017-12-29
Applicant: 广东温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC: C12N15/85 , C12N5/10 , A01K67/027
CPC classification number: C12N15/85 , A01K67/0275 , A01K2227/108 , A01K2267/02
Abstract: 本发明公开了一种定点整合外源DNA转基因猪的构建方法，包括以下步骤：S1、安全靶点筛选及靶点绑定gRNA切割效率验证；S2、构建同源臂供体质粒，并获得定点整合转基因细胞系；S3、外源DNA定点整合转基因猪的构建。本发明在供体质粒中引入gRNA靶点序列，利用细胞内转录gRNA诱导Cas9核酸酶切割靶基因同时，线性化供体质粒，大大简化试验步骤，节约人力，且有利于提高共转染效率。本发明定点整合所用载体较少，同源臂大小适中，更有利于获得转基因细胞系，将高效定点整合技术，高活力定点转基因细胞培育技术与体细胞克隆技术结合，有利于定点整合转基因动物高效制备，加快转基因动物新品种培育速度。
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公开(公告)号：CN103966188B
公开(公告)日：2016-04-20
申请号：CN201410161721.0
申请日：2014-04-22
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种可在动物细胞表达分泌的重组葡聚糖酶及其重组方法和应用。所述可在动物细胞表达分泌的重组葡聚糖酶的核苷酸序列为SEQ ID No:1或SEQ ID No:3。所述重组葡聚糖酶是经过对微生物源基因进行密码子改造和信号肽替换，筛选到适合在动物细胞表达分泌的2个葡聚糖酶基因；经对该两个基因重组改造，获得两个可在动物细胞表达分泌新的重组酶。本发明获得的两个全新的重组β-葡聚糖酶pBgA3pEG和pBg2ApEG可在动物细胞表达分泌，具有更宽pH适应性和耐受性，不但可以用于动物饲料酶制剂开发，同时可以用于转基因动物生产。
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