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公开(公告)号：CN118389470A
公开(公告)日：2024-07-26
申请号：CN202410617468.9
申请日：2024-05-17
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种具有高热稳定性的几丁质酶突变体D615S及其构建方法与应用。对野生型几丁质酶Chi1通过半理性设计的方法进行了热稳定改造，将位于第615位天冬氨酸的点突变为丝氨酸，得到的突变体与野生型的相比，在40℃的半衰期提高了3.6倍，45℃的半衰期提高了24倍。当对100 g/L的粉粒几丁质在45℃下降解60 h，得到48 g/L的还原糖，降解率为48%，对100 g/L几丁质含量为20%的龙虾壳降解60 h，得9 g/L的还原糖，降解率可达到45%，通过对降解产物进行鉴定，发现产物为N‑乙酰氨基葡萄糖和几丁二糖的质量比为4:1，具有良好的市场前景。
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公开(公告)号：CN111647099B
公开(公告)日：2021-11-02
申请号：CN202010654591.X
申请日：2020-07-09
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种从废弃小龙虾壳中制备几丁质纳米纤维的方法。该方法的步骤如下：废弃的小龙虾壳经过分拣，除去油脂及附着物，清洗后烘干并磨成虾壳粉；称取虾壳粉0.2‑1g，加入4‑20的强极性有机试剂在室温下进行搅拌溶解，搅拌转速应不低于1200 rpm，搅拌时间不低于12 h；溶解结束后，加入4‑20mL强极性有机试剂稀释，并滤去不溶物，收集过滤清液，加40‑400mL水充分析出几丁质，收集几丁质，干燥后称量并计算提取率；将上述步骤中含有强极性有机试剂的混合液通过离心收集至溶剂回收装置，加热回收。该方法可有效提取虾壳粉中的几丁质，提取率可达到15.26%，条件温和、操作简单，且试剂可回收利用。
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公开(公告)号：CN109810966B
公开(公告)日：2021-05-18
申请号：CN201910242877.4
申请日：2019-03-28
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明涉及一种几丁质酶CmChi6基因及其克隆表达与应用。本发明首次克隆出具有如SEQ ID No.1所示核苷酸序列的外切几丁质酶CmChi6基因，并获得了高活性外切几丁质酶，其制备方法简单，生产成本低，产品易保存，适宜的酶解温度为45℃，酶解最适pH为7.4，在25‑50℃时热稳定性良好，33 h仍保持60%以上酶活；最适pH 7.4，在pH7.0‑10.0，33h酶活仍保持75％以上；Ba2+对CmChi6活力具有稍微的激活作用；CmChi6对胶体几丁质具有高降解活性，可用该酶制备几丁二糖，转化率高，能源消耗少，环境友好，在工业化降解几丁质应用中具有重要的经济价值。
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公开(公告)号：CN111647099A
公开(公告)日：2020-09-11
申请号：CN202010654591.X
申请日：2020-07-09
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种从废弃小龙虾壳中制备几丁质纳米纤维的方法。该方法的步骤如下：废弃的小龙虾壳经过分拣，除去油脂及附着物，清洗后烘干并磨成虾壳粉；称取虾壳粉0.2-1g，加入4-20的强极性有机试剂在室温下进行搅拌溶解，搅拌转速应不低于1200 rpm，搅拌时间不低于12 h；溶解结束后，加入4-20mL强极性有机试剂稀释，并滤去不溶物，收集过滤清液，加40-400mL水充分析出几丁质，收集几丁质，干燥后称量并计算提取率；将上述步骤中含有强极性有机试剂的混合液通过离心收集至溶剂回收装置，加热回收。该方法可有效提取虾壳粉中的几丁质，提取率可达到15.26%，条件温和、操作简单，且试剂可回收利用。
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公开(公告)号：CN110029097A
公开(公告)日：2019-07-19
申请号：CN201910243768.4
申请日：2019-03-28
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种糖苷水解酶CmNAGase及其克隆表达与应用。将从土壤中筛到的菌株Chitinolyticbacter meiyuanensis SYBC-H1进行基因组测序分析、克隆CmNAGase、构建重组菌株、表达CmNAGase蛋白、纯化HIS-TAG，并鉴定重组蛋白具有糖苷水解酶的性质，在高温环境下仍保证良好的酶活性，属于内切酶，且能分别向几丁二糖、几丁三糖、几丁四糖、几丁五糖和几丁六糖的糖链转移一个乙酰氨基基葡萄糖使其糖链长度增加，可通过酶工程、合成生物学对其进行分子改造使该酶的酶促反应的方向朝增加糖链的方向进行，为人工合成几丁寡糖奠定基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN118460510A
公开(公告)日：2024-08-09
申请号：CN202410208266.9
申请日：2024-02-26
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种可高效降解粉粒几丁质的酶Chi1克隆表达及其应用。该酶的编码基因来源于几丁质降解菌Chitinibacter sp.GC72，属于糖苷水解酶18家族的几丁质酶，将其在大肠杆菌中进行了异源表达，获得的重组酶在30~40℃和pH 4.0‑10.0展现出优异活性，具有良好的环境耐受性。几丁质酶Chi1可高效降解几丁质类底物，也能直接降解如龙虾壳、大闸蟹壳、灵芝等含有几丁质的生物质，降解几丁质的产物主要为(GlcNAc)2，伴有少量GlcNAc和(GlcNAc)3。其中，降解胶体几丁质和粉粒几丁质时，酶活分别达到493.73 U/mg和91.76 U/mg，为目前最高水平。另外，通过以几丁寡糖作为底物研究Chi1水解模式，确认Chi1具有双功能，同时展现出外切活性和N‑乙酰葡萄糖苷活性。本发明为粉粒几丁质和废弃几丁质富含物的的高效降解提供了新的方向，具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN113621603B
公开(公告)日：2024-01-26
申请号：CN202110948167.0
申请日：2021-08-18
Applicant: 南京工业大学
IPC: C12N11/10
Abstract: 本发明公开了一种辅因子与辅因子依赖性酶的共固定化连续催化的方法，研究是通过几丁质部分脱乙酰的通过电荷作用对辅因子进行固定，几丁质结合结构域与将辅因子依赖性酶融合表达实现部分脱乙酰几丁质对酶进行固定化，形成共固定化催化剂。在不额外添加辅因子的情况下，能够实现良好的重复利用效果，在连续利用五次，最优条件下转化率能保持60%‑90%，这种辅因子固定化循环利用方法能够大大降低体外酶催化过程的成本，具有非常好的经济利用价值。
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公开(公告)号：CN112876438B
公开(公告)日：2023-09-19
申请号：CN202110073615.7
申请日：2021-01-20
Applicant: 南京工业大学
IPC: C07D307/66
Abstract: 本发明公开了一种高纯度3‑乙酰氨基‑5‑乙酰基呋喃的分离纯化方法。3‑乙酰氨基‑5‑乙酰基呋喃（3A5AF）是一种重要的平台化合物，可用来制备众多高附加值化学品，有着广泛的应用前景。本发明分离纯化方法，包括萃取，脱色，结晶等工艺过程，其特征在于对萃取剂种类，结晶浓度、温度以及结晶时间进行了优化，从而生产出高纯度的3A5AF，并且操作工艺简单，生产成本低。另本发明工艺中所用溶剂均可回收再利用。
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公开(公告)号：CN112941054A
公开(公告)日：2021-06-11
申请号：CN202110021973.3
申请日：2021-01-08
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种几丁质内切酶CmChi4及其克隆表达与应用。通过基因工程手段将几丁质酶基因CmChi4构建在质粒pCOLDI上，并转入E.coli BL21(DE3)中表达，该重组酶分子量大小为72.1kDa。对CmChi4酶学性质研究表明，在温度50℃、pH为6时活力最佳；Fe2+、K+、Al3+和Zn2+对酶CmChi4具有较强的激活。此外，几丁质内切酶CmChi4水解胶体几丁质的产物为(GlcNAc)2、(GlcNAc)3和(GlcNAc)4，稳定性好，适合产业化。
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公开(公告)号：CN110075809A
公开(公告)日：2019-08-02
申请号：CN201910326943.6
申请日：2019-04-23
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开一种提高粉粒几丁质对酶蛋白的吸附能力的方法及其应用。将粉粒几丁质通过高压均质机处理后得到纤维直径为纳米级的几丁质纤维，用于吸附带有几丁质结合域蛋白（ChBD）的融合酶，经过一系列的条件优化后发现，预处理后的几丁质纤维对酶蛋白的吸附效果相较未处理几丁质粉末有了较大提升。本发明提供一种改进常规粉粒几丁质对酶蛋白吸附能力的方法，该方法绿色环保不涉及强酸强碱的使用，制备得到的几丁质纤维具有直径小、比较面积大、结合蛋白能力强的特点，在酶的固定化材料领域具有较好的应用与发展前景。
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