公开(公告)号：CN118389470A

公开(公告)日：2024-07-26

申请号：CN202410617468.9

申请日：2024-05-17

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 张阿磊 ,  张馨 ,  周宁 ,  陈飞飞 ,  陈可泉

IPC: C12N9/42 ,  C12N15/70 ,  C12N15/56 ,  C12P19/26 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种具有高热稳定性的几丁质酶突变体D615S及其构建方法与应用。对野生型几丁质酶Chi1通过半理性设计的方法进行了热稳定改造，将位于第615位天冬氨酸的点突变为丝氨酸，得到的突变体与野生型的相比，在40℃的半衰期提高了3.6倍，45℃的半衰期提高了24倍。当对100 g/L的粉粒几丁质在45℃下降解60 h，得到48 g/L的还原糖，降解率为48%，对100 g/L几丁质含量为20%的龙虾壳降解60 h，得9 g/L的还原糖，降解率可达到45%，通过对降解产物进行鉴定，发现产物为N‑乙酰氨基葡萄糖和几丁二糖的质量比为4:1，具有良好的市场前景。

公开(公告)号：CN118460510A

公开(公告)日：2024-08-09

申请号：CN202410208266.9

申请日：2024-02-26

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 张阿磊 ,  张馨 ,  刘全振 ,  周宁 ,  魏国光 ,  陈可泉

IPC: C12N9/42 ,  C12N15/56 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/14 ,  C12P19/26 ,  C12P19/12 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种可高效降解粉粒几丁质的酶Chi1克隆表达及其应用。该酶的编码基因来源于几丁质降解菌Chitinibacter sp.GC72，属于糖苷水解酶18家族的几丁质酶，将其在大肠杆菌中进行了异源表达，获得的重组酶在30~40℃和pH 4.0‑10.0展现出优异活性，具有良好的环境耐受性。几丁质酶Chi1可高效降解几丁质类底物，也能直接降解如龙虾壳、大闸蟹壳、灵芝等含有几丁质的生物质，降解几丁质的产物主要为(GlcNAc)2，伴有少量GlcNAc和(GlcNAc)3。其中，降解胶体几丁质和粉粒几丁质时，酶活分别达到493.73 U/mg和91.76 U/mg，为目前最高水平。另外，通过以几丁寡糖作为底物研究Chi1水解模式，确认Chi1具有双功能，同时展现出外切活性和N‑乙酰葡萄糖苷活性。本发明为粉粒几丁质和废弃几丁质富含物的的高效降解提供了新的方向，具有良好的应用前景。