公开(公告)号：CN107267472B

公开(公告)日：2020-11-10

申请号：CN201710476350.9

申请日：2017-06-21

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 陈可泉 ,  陆晓璐 ,  王昕 ,  张博文 ,  毛静文

IPC: C12N9/02 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种提高大肠杆菌甲醇代谢途径中限速酶活性的方法，将大肠杆菌过表达基因Mdh和Hps‑Phi后，通过添加激活蛋白nudF，增强甲醇脱氢酶的酶活，从而提高甲醇的代谢量；其中，所述基因Mdh和Hps‑Phi为来源于甲醇芽孢杆菌MGA3的Mdh2和Hps‑Phi；所述激活蛋白nudF来源于E.coli MG1655。本发明在大肠杆菌中进行甲醇代谢路径的组装，实现甲醇代谢，并通过分子手段改造提高甲醇脱氢酶Mdh的酶活，实现了甲醇代谢的提高。

公开(公告)号：CN106434782A

公开(公告)日：2017-02-22

申请号：CN201610895160.6

申请日：2016-10-14

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 陈可泉 ,  张博文 ,  王昕 ,  钱娟 ,  蔡沛沛 ,  欧阳平凯

IPC: C12P13/24 ,  C12N15/70 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种产顺式-4-羟脯氨酸的方法，该方法通过在宿主菌细胞内构建过表达脯氨酸羟化酶基因Ecp4H，利用CRISPR-Cas9技术抑制脯氨酸降解途径中脯氨酸羟化酶基因putA以及α-酮戊二酸降解途径中琥珀酸脱氢酶基因sucA、sucB，异柠檬酸裂解酶基因aceA和异柠檬酸激酶基因aceK的表达得到重组菌株，并将重组菌株发酵培养后，全细胞转化生产顺式-4-羟脯氨酸。本方法培养方式简单，并且菌株活力较高，产物转化率较高。

公开(公告)号：CN106282256B

公开(公告)日：2019-08-20

申请号：CN201610895213.4

申请日：2016-10-14

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 陈可泉 ,  张博文 ,  王昕 ,  钱娟 ,  蔡沛沛 ,  欧阳平凯

IPC: C12P13/24 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种生产顺式‑4‑羟脯氨酸的生物转化法。本发明方法通过在大肠杆菌BL21(DE3)胞内共表达了脯氨酸羟化酶和脯氨酸转运蛋白，实现了高产顺式‑4‑羟脯氨酸在重组菌中的高效合成。与现有的顺式‑4‑羟脯氨酸发酵法相比，该方法操作简便、可持续、性价比高，具有良好的工业化前景。

公开(公告)号：CN106282256A

公开(公告)日：2017-01-04

申请号：CN201610895213.4

申请日：2016-10-14

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 陈可泉 ,  张博文 ,  王昕 ,  钱娟 ,  蔡沛沛 ,  欧阳平凯

IPC: C12P13/24 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种生产顺式-4-羟脯氨酸的生物转化法。本发明方法通过在大肠杆菌BL21(DE3)胞内共表达了脯氨酸羟化酶和脯氨酸转运蛋白，实现了高产顺式-4-羟脯氨酸在重组菌中的高效合成。与现有的顺式-4-羟脯氨酸发酵法相比，该方法操作简便、可持续、性价比高，具有良好的工业化前景。

公开(公告)号：CN106434782B

公开(公告)日：2020-01-10

申请号：CN201610895160.6

申请日：2016-10-14

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 陈可泉 ,  张博文 ,  王昕 ,  钱娟 ,  蔡沛沛 ,  欧阳平凯

IPC: C12P13/24 ,  C12N15/70 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种产顺式‑4‑羟脯氨酸的方法，该方法通过在宿主菌细胞内构建过表达脯氨酸羟化酶基因Ecp4H，利用CRISPR‑Cas9技术抑制脯氨酸降解途径中脯氨酸羟化酶基因putA以及α‑酮戊二酸降解途径中琥珀酸脱氢酶基因sucA、sucB，异柠檬酸裂解酶基因aceA和异柠檬酸激酶基因aceK的表达得到重组菌株，并将重组菌株发酵培养后，全细胞转化生产顺式‑4‑羟脯氨酸。本方法培养方式简单，并且菌株活力较高，产物转化率较高。

公开(公告)号：CN104593403A

公开(公告)日：2015-05-06

申请号：CN201510045158.5

申请日：2015-01-28

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 陈可泉 ,  曹伟佳 ,  马伟超 ,  张博文 ,  欧阳平凯

IPC: C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P17/06

Abstract: 本发明涉及一种合成匹诺塞林的方法，公开了菌株的构建方法与高效合成匹诺塞林的新途径，并对其发酵方式进行了底物浓度和诱导时间的优化，证实该菌能以L-苯丙氨酸和葡萄糖为底物，高效合成类黄酮化合物,特别是以0.03M葡萄糖和3 mM L-苯丙氨酸为底物，经本发明方法中所构建的菌株CY003发酵合成匹诺塞林，高达27.76 mg/L，是菌株CY001产量的近39倍，同时丙二酰辅酶A是菌株CY001产的近2倍。

公开(公告)号：CN107267472A

公开(公告)日：2017-10-20

申请号：CN201710476350.9

申请日：2017-06-21

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 陈可泉 ,  陆晓璐 ,  王昕 ,  张博文 ,  毛静文

IPC: C12N9/02 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种提高大肠杆菌甲醇代谢途径中限速酶活性的方法，将大肠杆菌过表达基因Mdh和Hps-Phi后，通过添加激活蛋白nudF，增强甲醇脱氢酶的酶活，从而提高甲醇的代谢量；其中，所述基因Mdh和Hps-Phi为来源于甲醇芽孢杆菌MGA3的Mdh2和Hps-Phi；所述激活蛋白nudF来源于E.coli MG1655。本发明在大肠杆菌中进行甲醇代谢路径的组装，实现甲醇代谢，并通过分子手段改造提高甲醇脱氢酶Mdh的酶活，实现了甲醇代谢的提高。