公开(公告)号：CN112592844B

公开(公告)日：2023-08-18

申请号：CN202110029601.5

申请日：2021-01-11

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 应汉杰 ,  牛欢青 ,  宋佳睿 ,  闵志迪 ,  陈勇 ,  刘庆国 ,  柳东

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C12N9/24 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明公开了一种重组毕赤酵母基因工程菌及其构建方法与在产木聚糖酶中的应用。所述重组毕赤酵母基因工程菌是在所述毕赤酵母菌中过表达凝集素蛋白基因LMAN2。上述重组菌加强了毕赤酵母菌的生物成膜能力，解决现有技术中毕赤酵母菌成膜能力弱，不能用于连续固定化发酵的问题。具体地，在游离发酵条件下毕赤酵母基因工程菌产木聚糖酶酶活比原始菌提高了48.9％；在单次固定化发酵条件下毕赤酵母基因工程菌产木聚糖酶酶活比原始菌提高了38.8％，且重组菌能够稳定连续进行至少七批次的固定化发酵产酶。

公开(公告)号：CN116640675A

公开(公告)日：2023-08-25

申请号：CN202310555901.6

申请日：2023-05-17

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 牛欢青 ,  闵志迪 ,  应汉杰 ,  陈勇 ,  柳东 ,  庄伟 ,  朱晨杰 ,  李明 ,  赵谷林

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C12N15/31 ,  C12N15/56 ,  C12N9/24 ,  C12N11/12 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明公开了一株过表达CLB2的重组毕赤酵母基因工程菌及其构建方法和应用。所述重组毕赤酵母基因工程菌是在出发毕赤酵母Komagataella phaffii GS115‑xyn中过表达细胞周期相关基因CLB2。本发明的重组毕赤酵母基因工程菌对比出发菌在发酵过程中，细胞的细胞周期随着发酵时间的增加，不断向G2/M期富集，G2/M期细胞的增多有助于毕赤酵母成膜能力的增强，而且改造后的毕赤酵母基因工程菌在连续发酵过程中发酵性能更高，产酶酶活性更强，在发酵上具有明显优势。

公开(公告)号：CN116536176A

公开(公告)日：2023-08-04

申请号：CN202310555884.6

申请日：2023-05-17

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 牛欢青 ,  闵志迪 ,  应汉杰 ,  赵谷林 ,  陈勇 ,  柳东 ,  朱晨杰 ,  庄伟 ,  李明

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C12N15/31 ,  C12N11/12 ,  C12N9/24 ,  C12N15/56 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明公开了一株重组毕赤酵母基因工程菌及其构建方法和应用。所述重组毕赤酵母基因工程菌是由出发毕赤酵母的PAS_FragB_0067基因过表达后改造得到。本发明以能够产木聚糖酶的毕赤酵母表达菌Komagataella phaffii GS115‑xyn为出发菌，首次过表达PAS_FragB_0067基因，成功构建重组菌0067*，提升了毕赤酵母生物成膜能力，解决现有技术中毕赤酵母菌成膜能力弱，发酵效率低等的问题。并且改造后的毕赤酵母基因工程菌在连续发酵过程中发酵性能更高，产酶酶活性更强，在发酵上具有明显优势。

公开(公告)号：CN113046256A

公开(公告)日：2021-06-29

申请号：CN202110294510.4

申请日：2021-03-19

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 应汉杰 ,  牛欢青 ,  宋佳睿 ,  闵志迪 ,  陈勇 ,  刘庆国 ,  柳东

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C12N9/24 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明公开了一种重组毕赤酵母基因工程菌及其构建方法和应用，该毕赤酵母基因工程菌是通过在毕赤酵母菌中过表达转录抑制因子和激活因子HSF1构建得到的。所述构建方法包括如下步骤：（1）对毕赤酵母菌基因组进行PCR扩增得到HSF1基因片段；（2）将HSF1基因片段克隆到表达质粒上，得到重组质粒；（3）将线性化的重组质粒导入毕赤酵母菌中，筛选得到毕赤酵母基因工程菌。毕赤酵母基因工程菌能够有效提高自身生物膜成膜能力，使得重组毕赤酵母在单次固定化发酵条件下产酶的酶活力比游离发酵的出发菌提高了28.3％，发酵周期缩短了36.6%。重组菌能够稳定连续进行至少七批次的固定化发酵产酶，经过七批次固定化发酵后，重组菌发酵产酶的酶活比出发菌高出约7倍。

公开(公告)号：CN113046256B

公开(公告)日：2023-08-25

申请号：CN202110294510.4

申请日：2021-03-19

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 应汉杰 ,  牛欢青 ,  宋佳睿 ,  闵志迪 ,  陈勇 ,  刘庆国 ,  柳东

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C12N9/24 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明公开了一种重组毕赤酵母基因工程菌及其构建方法和应用，该毕赤酵母基因工程菌是通过在毕赤酵母菌中过表达转录抑制因子和激活因子HSF1构建得到的。所述构建方法包括如下步骤：（1）对毕赤酵母菌基因组进行PCR扩增得到HSF1基因片段；（2）将HSF1基因片段克隆到表达质粒上，得到重组质粒；（3）将线性化的重组质粒导入毕赤酵母菌中，筛选得到毕赤酵母基因工程菌。毕赤酵母基因工程菌能够有效提高自身生物膜成膜能力，使得重组毕赤酵母在单次固定化发酵条件下产酶的酶活力比游离发酵的出发菌提高了28.3％，发酵周期缩短了36.6%。重组菌能够稳定连续进行至少七批次的固定化发酵产酶，经过七批次固定化发酵后，重组菌发酵产酶的酶活比出发菌高出约7倍。

公开(公告)号：CN112592844A

公开(公告)日：2021-04-02

申请号：CN202110029601.5

申请日：2021-01-11

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 应汉杰 ,  牛欢青 ,  宋佳睿 ,  闵志迪 ,  陈勇 ,  刘庆国 ,  柳东

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C12N9/24 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明公开了一种重组毕赤酵母基因工程菌及其构建方法与在产木聚糖酶中的应用。所述重组毕赤酵母基因工程菌是在所述毕赤酵母菌中过表达凝集素蛋白基因LMAN2。上述重组菌加强了毕赤酵母菌的生物成膜能力，解决现有技术中毕赤酵母菌成膜能力弱，不能用于连续固定化发酵的问题。具体地，在游离发酵条件下毕赤酵母基因工程菌产木聚糖酶酶活比原始菌提高了48.9％；在单次固定化发酵条件下毕赤酵母基因工程菌产木聚糖酶酶活比原始菌提高了38.8％，且重组菌能够稳定连续进行至少七批次的固定化发酵产酶。