公开(公告)号：CN102839185B

公开(公告)日：2014-06-25

申请号：CN201110166533.3

申请日：2011-06-21

Applicant: 南开大学

Inventor： 李明刚 ,  卫一鸣 ,  王维婧 ,  马百成 ,  胡晓宇 ,  张耀方 ,  乔坤艳 ,  李宠 ,  马志华

IPC: C12N15/62 ,  C12N15/63 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C07K19/00 ,  A61K38/58 ,  A61P3/10 ,  A61P7/02 ,  C12R1/19 ,  A61K38/26

Abstract: 本发明涉及一种生产治疗糖尿病及血栓并发症的双功能药物(rolGLP-HV)工程菌的构建、制备方法和应用技术。将对2型糖尿病具有“治标治本”疗效的长效促胰岛素rolGLP-1与有效防治其心脑血管并发症的水蛭素rHV1融合，使其具有预防和治疗糖尿病及血栓并发症的双重功能。具体来说，应用基因工程技术获得rolGLP-1和rHV1的融合基因rolGLP-HV，并将其克隆到大肠杆菌表达载体pET22b(+)，构建表达载体pNK-EC-rolGLP-HV，转化大肠杆菌，获得高表达rolGLP-HV的工程菌NK-rolGLP-HV-E007。该菌株通过诱导表达和纯化可获得高纯度rolGLP-HV。胡氏血栓模型小鼠灌胃rolGLP-HV，可显著减缓其尾部血栓出现的时间和程度；糖尿病模型小鼠灌胃rolGLP-HV，可明显降低血糖水平并改善糖尿病症状，因此，本发明可用于开发同时治疗糖尿病及其血栓并发症的双功能药物。

公开(公告)号：CN102839185A

公开(公告)日：2012-12-26

申请号：CN201110166533.3

申请日：2011-06-21

Applicant: 南开大学

Inventor： 李明刚 ,  卫一鸣 ,  王维婧 ,  马百成 ,  胡晓宇 ,  张耀方 ,  乔坤艳 ,  李宠 ,  马志华

IPC: C12N15/62 ,  C12N15/63 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C07K19/00 ,  A61K38/58 ,  A61P3/10 ,  A61P7/02 ,  C12R1/19 ,  A61K38/26

Abstract: 本发明涉及一种生产治疗糖尿病及血栓并发症的双功能药物(rolGLP-HV)工程菌的构建、制备方法和应用技术。将对2型糖尿病具有“治标治本”疗效的长效促胰岛素rolGLP-1与有效防治其心脑血管并发症的水蛭素rHV1融合，使其具有预防和治疗糖尿病及血栓并发症的双重功能。具体来说，应用基因工程技术获得rolGLP-1和rHV1的融合基因rolGLP-HV，并将其克隆到大肠杆菌表达载体pET22b(+)，构建表达载体pNK-EC-rolGLP-HV，转化大肠杆菌，获得高表达rolGLP-HV的工程菌NK-rolGLP-HV-E007。该菌株通过诱导表达和纯化可获得高纯度rolGLP-HV。胡氏血栓模型小鼠灌胃rolGLP-HV，可显著减缓其尾部血栓出现的时间和程度；糖尿病模型小鼠灌胃rolGLP-HV，可明显降低血糖水平并改善糖尿病症状，因此，本发明可用于开发同时治疗糖尿病及其血栓并发症的双功能药物。

公开(公告)号：CN103382482A

公开(公告)日：2013-11-06

申请号：CN201210132963.8

申请日：2012-05-03

Applicant: 南开大学

Inventor： 李明刚 ,  李宠 ,  乔坤艳 ,  张耀方 ,  马百成 ,  马志华 ,  马超 ,  董震 ,  郝军凤 ,  姬艳丽

IPC: C12N15/74 ,  C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N1/13 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明描述了一种食用安全性整合型螺旋藻高效表达载体p21GZ-GAG的构建方法及应用技术。该载体含有GFP标签、螺旋藻特异性启动子和10拷贝促胰岛素GLP-1基因。通过去除自杀质粒pSZ21中Tn5转座单元的抗生素基因构建载体p21GZ；分别克隆GFP、螺旋藻特异启动子AP以及10拷贝促胰岛素GLP-1基因，并串联连接成表达单元GAG，将其插入p21GZ获得p21GZ-GAG。该载体保留了其自杀型质粒和Tn5介导的转座整合能力，可将表达单元GAG整合进螺旋藻基因组，通过螺旋藻特异启动子AP启动GLP-1的表达；剔除抗性标记而通过GFP进行筛选，保证其食用安全性，可研发防治糖尿病的保健品。

公开(公告)号：CN104178496A

公开(公告)日：2014-12-03

申请号：CN201310200002.0

申请日：2013-05-27

Applicant: 南开大学

Inventor： 李明刚 ,  郝军凤 ,  乔坤艳 ,  马超 ,  马百成 ,  王宇 ,  李宠 ,  张耀方 ,  马志华 ,  姬艳丽 ,  董震 ,  屠培培 ,  李晓丹

IPC: C12N15/29 ,  C12N15/52 ,  C12N15/63 ,  C12N15/74 ,  C12N15/82 ,  A01H5/00 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明描述了一种植物低磷应答调控单元PSS(PHR1-35S-SIZ1)表达载体pX6-PHR1-35S-SIZ1的构建技术。该表达载体的构建方法是，从拟南芥中克隆得到SIZ1基因，将35S启动子插入到SIZ1基因的上游，构建35S-SIZ1表达单元，将该表达单元插入植物表达载体pX6，构建载体pX6-35S-SIZ1，再将PHR1基因插入该载体中，得到表达载体pX6-PHR1-35S-SIZ1。用表达载体pX6-PHR1-35S-SIZ1转化农杆菌GV3101，得到同时含有PHR1基因和SIZ1基因的工程农杆菌菌株NK-314。