公开(公告)号：CN114717299B

公开(公告)日：2024-04-19

申请号：CN202111320426.1

申请日：2021-11-09

Applicant: 厦门大学

Inventor： 杨朝勇 ,  宋彦龄 ,  朱琳 ,  张弛 ,  许元风 ,  林顥霆 ,  尤振龙

IPC: C12Q1/686

Abstract: 本发明公开了一种糖基化外泌体PD‑L1的检测方法，包括如下步骤：1)分离外泌体；2)连接第一偶合物与第一DNA，所述的第一偶合物能够与外泌体的糖基结合；3)加入第一偶合物与第一DNA的偶联物；4)加入PD‑L1适配体；5)稀释反应溶液；6)加入连接臂DNA；7)在连接臂的作用下DNA连接酶将第一DNA与PD‑L1适配体连接；8)对与连接臂互补的第一DNA与PD‑L1适配体连接部分进行扩增，检测扩增信号。本发明方法特异性检测糖基化的外泌体PD‑L1，无需分离释放糖蛋白，检测灵敏度高，检测限为1.09pg/mL，适用于多种生物体系。

公开(公告)号：CN114717299A

公开(公告)日：2022-07-08

申请号：CN202111320426.1

申请日：2021-11-09

Applicant: 厦门大学

Inventor： 杨朝勇 ,  宋彦龄 ,  朱琳 ,  张弛 ,  许元风 ,  林顥霆 ,  尤振龙

IPC: C12Q1/686

Abstract: 本发明公开了一种糖基化外泌体PD‑L1的检测方法，包括如下步骤：1)分离外泌体；2)连接第一偶合物与第一DNA，所述的第一偶合物能够与外泌体的糖基结合；3)加入第一偶合物与第一DNA的偶联物；4)加入PD‑L1适配体；5)稀释反应溶液；6)加入连接臂DNA；7)在连接臂的作用下DNA连接酶将第一DNA与PD‑L1适配体连接；8)对与连接臂互补的第一DNA与PD‑L1适配体连接部分进行扩增，检测扩增信号。本发明方法特异性检测糖基化的外泌体PD‑L1，无需分离释放糖蛋白，检测灵敏度高，检测限为1.09pg/mL，适用于多种生物体系。

公开(公告)号：CN114354913B

公开(公告)日：2024-07-19

申请号：CN202111675939.4

申请日：2021-12-31

Applicant: 厦门大学

Inventor： 杨朝勇 ,  宋彦龄 ,  康思因 ,  尤振龙 ,  王文成 ,  张弛 ,  朱琳

IPC: G01N33/53 ,  C12Q1/682

Abstract: 本发明公开了一种外泌体PD‑L1糖基化检测方法，包括如下步骤：1)用PD‑L1适体即序列PDL1‑S‑T1，标记外泌体PD‑L1；2)通过修饰环炔基DBCO的DNA即序列DBCO‑S‑T2，与代谢标记的外泌体表面糖上叠氮的无铜环加成反应标记外泌体的糖；3)加入DNA连接臂，所述的连接臂分别具有和序列PDL1‑S‑T1的至少一段互补的序列以及和序列DBCO‑S‑T2的至少一段互补的序列；4)加入探针H1和H2，其中，所述的探针H1和探针H2互补，且其中一探针分别具有和序列PDL1‑S‑T1的至少一段互补的序列以及和序列DBCO‑S‑T2的至少一段互补的序列；5)扩增，检测扩增信号，得到外泌体PD‑L1糖基化信息。

公开(公告)号：CN115449511B

公开(公告)日：2024-01-12

申请号：CN202211040291.8

申请日：2022-08-29

Applicant: 厦门大学

Inventor： 宋彦龄 ,  杨朝勇 ,  吴秋月 ,  王文成 ,  齐彤旭 ,  张驰 ,  尤振龙 ,  许醒 ,  陈曦铭 ,  张倩楠

IPC: C12N5/09 ,  G01N33/569

Abstract: 本发明公开了一种基于代谢标记策略的新生肿瘤源外泌体选择性分离方法，包括如下步骤：1)非天然糖对肿瘤靶标进行糖代谢标记使得新生外泌体带有叠氮基团；2)分离外泌体或获取具有外泌体的样品；3)在步骤2)的外泌体或具有外泌体的样品中加入能与靶标蛋白以及叠氮基团反应的捕获连接体，所述的捕获连接体为DBCO‑肿瘤靶标蛋白适配体‑Biotin；4)接着加入单链DNA结合蛋白SSB；5)对修饰上捕获连接体的外泌体进行捕获及分离，得到的外泌体即定义为新生肿瘤源外泌体。本发明方法可以在不改变外泌体表面蛋白表达的情况下在混合体系样本中靶向亲和识别新生肿瘤源外泌体，从而更有效的进行新生肿瘤源外泌体分析。

公开(公告)号：CN115449511A

公开(公告)日：2022-12-09

申请号：CN202211040291.8

申请日：2022-08-29

Applicant: 厦门大学

Inventor： 宋彦龄 ,  杨朝勇 ,  吴秋月 ,  王文成 ,  齐彤旭 ,  张驰 ,  尤振龙 ,  许醒 ,  陈曦铭 ,  张倩楠

IPC: C12N5/09 ,  G01N33/569

Abstract: 本发明公开了一种基于代谢标记策略的新生肿瘤源外泌体选择性分离方法，包括如下步骤：1)非天然糖对肿瘤靶标进行糖代谢标记使得新生外泌体带有叠氮基团；2)分离外泌体或获取具有外泌体的样品；3)在步骤2)的外泌体或具有外泌体的样品中加入能与靶标蛋白以及叠氮基团反应的捕获连接体，所述的捕获连接体为DBCO‑肿瘤靶标蛋白适配体‑Biotin；4)接着加入单链DNA结合蛋白SSB；5)对修饰上捕获连接体的外泌体进行捕获及分离，得到的外泌体即定义为新生肿瘤源外泌体。本发明方法可以在不改变外泌体表面蛋白表达的情况下在混合体系样本中靶向亲和识别新生肿瘤源外泌体，从而更有效的进行新生肿瘤源外泌体分析。

公开(公告)号：CN114354913A

公开(公告)日：2022-04-15

申请号：CN202111675939.4

申请日：2021-12-31

Applicant: 厦门大学

Inventor： 杨朝勇 ,  宋彦龄 ,  康思因 ,  尤振龙 ,  王文成 ,  张弛 ,  朱琳

IPC: G01N33/53 ,  C12Q1/682

Abstract: 本发明公开了一种外泌体PD‑L1糖基化检测方法，包括如下步骤：1)用PD‑L1适体即序列PDL1‑S‑T1，标记外泌体PD‑L1；2)通过修饰环炔基DBCO的DNA即序列DBCO‑S‑T2，与代谢标记的外泌体表面糖上叠氮的无铜环加成反应标记外泌体的糖；3)加入DNA连接臂，所述的连接臂分别具有和序列PDL1‑S‑T1的至少一段互补的序列以及和序列DBCO‑S‑T2的至少一段互补的序列；4)加入探针H1和H2，其中，所述的探针H1和探针H2互补，且其中一探针分别具有和序列PDL1‑S‑T1的至少一段互补的序列以及和序列DBCO‑S‑T2的至少一段互补的序列；5)扩增，检测扩增信号，得到外泌体PD‑L1糖基化信息。